10楼: Originally posted by 江苏虞游 at 2016-02-29 16:30:13
来晚了，不好意思哈，问题解决了吗？如果没有解决的话，同源臂一定要和载体上的一样，同源臂不会影响PCR扩增。...

8楼: Originally posted by 江苏虞游 at 2016-01-21 01:04:30
最近刚做完Seamless，酶切位点的选择是双酶切；其次最为关键的就是同源臂的设计，在此基础上加上你的目的基因引物，高保真PCR扩增后回收片段，当然在此之间要考虑移码的问题，目的基因3端根据需要考虑是否加终止密码 ...

2楼: Originally posted by lifechuteng at 2016-01-19 15:22:40
1. 我推荐双酶切，因为双酶切可以最大程度避免载体自连，无缝克隆酶中有的会有连接酶存在。建议跑电泳，并做空白对照以确保切开。如果您的质粒不太大，我非常推荐使用反向PCR方式进行载体线性化，这样假阳性比较少。 ...

2楼: Originally posted by lifechuteng at 2016-01-19 15:22:40
1. 我推荐双酶切，因为双酶切可以最大程度避免载体自连，无缝克隆酶中有的会有连接酶存在。建议跑电泳，并做空白对照以确保切开。如果您的质粒不太大，我非常推荐使用反向PCR方式进行载体线性化，这样假阳性比较少。 ...

2楼: Originally posted by lifechuteng at 2016-01-19 15:22:40
1. 我推荐双酶切，因为双酶切可以最大程度避免载体自连，无缝克隆酶中有的会有连接酶存在。建议跑电泳，并做空白对照以确保切开。如果您的质粒不太大，我非常推荐使用反向PCR方式进行载体线性化，这样假阳性比较少。 ...