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吕木木

新虫 (小有名气)

[交流] 设计SYBR荧光引物

跑荧光跑了一个多月了,快放假了还没有跑出来,引物设计一直特异性不高,怎么办啊,哪位大神帮设计一下,引物序列: ATGAAGAGAGATCACCGGGATACCTGCACGGATCAAAATGGTTCCAAGGGCGAATACTCGTCGTCCTCATCCTCAGTGCTGAATGGCAAGGCCAAAATTTGGGGACAAGACCAAGATGGCTGCGGCGGCAGTGGCGGCGGCGGCGGCGGCATGGATGAGTTGCTCGCCGTTTTGGGTTACAAGGTTCGGGCCTCAGACATGGCCGAGGTGGCGGAGAAGCTCGAGCAGCTGGAGATGGTCATGGGCTCTGCTCAGGAAGATGGGATTTCTCAGCTTTCTGATACAGTCCACTACAACCCATCTGATCTCTCCGGCTGGGTTCAGAGCATGCTCTCTGAGTTCAACACGGTTGACGGGTCAGCAATCGACGACCCACTTTTTGTTGCAGCTGGTTCTTCCTCAATCACCTCCATACATTTCTCCAATTCTCACCAGATTGAAAACCCAGCATCTCGGGTTTTCCACGACGATTCGGAATACGATCTCAGAGCAATTCCTGGCGTTGCGGCTTACCCACAAACCCATTTGGACTCGGAGGCTGAGAGCAGGAGAAAGCGATTGAAAACCGCAATTGGGTCCAATTCAATCGGGTCGAATTCCGGGGTTGGAGCCGACTCGGATTCTGTATCGGACCCAGCTCGGCCTCTGGTCCTGGTTGACTCACAAGAAACAGGCGTTAGACTCGTCCATACACTCGTGGCTTGTGCTGAGGCTGTTCAGCAAGAGAACCTGAAGCTCGCAGACGCGCTAGTGAAGCACGTGGGTCTACTCGCGGCCTCCCAAGCCGGCGCTATGAGAAAAGTCGCCACTTACTTTGCCGAAGCTCTGGCTCGTCGAATTTACCGAATTTACCCTCAGGACAGTCTGGATTCTTCATATTCAGATATTCTCCAGATGCACTTTTACGAGACCTGCCCCTATCTCAAGTTTGCTCACTTCACCGCAAACCAGGCCATTCTCGAAGCCTTTGCCACGGCAAGTAGAGTCCACGTCATTGATTTTGGGCTTAAGCAGGGGATGCAATGGCCAGCGCTCATGCAGGCCCTAGCATTGAGGCCCGGCGGGCCGCCCGCGTTTCGGCTTACAGGAATTGGCCCGCCGCAGCCCGACAACACGGACGCCTTGCAGCAGGTGGGATGGAAGCTGGCCCAATTGGCCGAAACTATTGGCGTAGAGTTTGAATTTCGGGGATTCGTCGCAAATAGTTTGGCAGATCTCGAACCCTCGATGCTCGAGATCCGCCCTCCAGATGTCGAGACAGTGGCGGTGAACTCGTGTTTTGAGCTCCACCCTCTCCTGGCTCGACCCGGGGCGGTTGAAAAGGTCTTGTCATCAATCAAGGCTATGAAGCCTAAGATTGTGACAATTGTGGAGCAGGAGGCAAACCATAATGGACCGATTTTCCTGGACCGGTTCAACGAGGCCTTGCATTATTACTCCAACTTGTTTGACTCGCTGGAGGGATCGTCCGGTCCGAGTCAGGATTTGGTCATGTCCGAGGTGTACTTGGGTCGACAGATATGCAACGTGGTAGCATGTGAAGGTCAGGACCGAGTCGAGCGACACGAGACTCTGACTCAGTGGCGAGGTCGGATGGACTCGGCCGGGTTCGACCTGGTTCACCTCGGGTCGAACGCGTTCAAGCAGGCCAGTATGTTGCTGGCTCTTTTCGCCGGCGGAGATGGGTACAGGGTGGAGGAGAACAATGGGTCTCTCATGCTTGGGTGGCACACACGGCCCCTCATAGCCACCTCAGCATGGCAGCTGGCGAGTTCGACTGAGTCAACCCGGTGA

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吕木木

新虫 (小有名气)

引用回帖:
3楼: Originally posted by lifechuteng at 2016-01-19 14:20:13
Prunus mume DELLA mRNA是这个吗?
PREDICTED: Prunus mume DELLA protein GAI (LOC103328576), mRNA

product length = 113
Forward primer  1    AGCAATCGACGACCCACTTT  20
Template        637  .......... ...

但似乎是的三个以上相同碱基太多,会不会产生错配啥的

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9楼2016-01-20 20:09:47
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lifechuteng

新虫 (小有名气)


小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
请问您的物种是什么?我来给您设计
2楼2016-01-19 14:13:46
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lifechuteng

新虫 (小有名气)

★ ★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
西门吹雪170: 金币+2, 鼓励回帖交流 2016-01-20 23:10:17
Prunus mume DELLA mRNA是这个吗?
PREDICTED: Prunus mume DELLA protein GAI (LOC103328576), mRNA

product length = 113
Forward primer  1    AGCAATCGACGACCCACTTT  20
Template        637  ....................  656

Reverse primer  1    AATCGTCGTGGAAAACCCGA  20
Template        749  ....................  730
3楼2016-01-19 14:20:13
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hnnh123

新虫 (初入文坛)

★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
西门吹雪170: 金币+1, 鼓励回帖交流 2016-01-20 23:10:35
荧光引物设计需要所检测物种的同源基因同时建库以提高特异性的吧,只有目的序列应该不行的。
6楼2016-01-19 16:54:34
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