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紫萸香慢001

新虫 (小有名气)

[交流] 求教求教:Taq酶作用???有没有人告诉我

Taq酶有没有逆转录酶的作用,比如我拿mRNA加入Taq酶,最终能合成cDNA吗。

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紫萸香慢001

新虫 (小有名气)

你决定吗,我查的文献里面有说可以的

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5楼2016-01-16 23:36:30
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紫萸香慢001

新虫 (小有名气)

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3楼: Originally posted by 原来,是这样 at 2016-01-16 23:11:30
没有用的。。。去买个反转录试剂盒,反转录cDNA不仅仅需要逆转录酶,还需要在反转录之前消化一下你提取的RNA里面的DNA,这样弄出来的cDNA质量才高。

我就是用的提RNA的试剂盒,为验证没有DNA污染,我就拿提取的mRNA,用普通DNA的试剂盒扩增相应目的片段,结果还有阳性结果,这说明有DNA污染,但是我已经很注意了,不知道怎么去除DNA污染,然后我看有的文献说Taq酶有逆转录酶的作用,就怀疑,是否我的RNA没有DNA污染,只不过Taq酶也有逆转录酶作用罢了。我不清楚到底为什么,求指教。

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6楼2016-01-16 23:42:29
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紫萸香慢001

新虫 (小有名气)

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2楼: Originally posted by 南有乔木张恺 at 2016-01-16 23:07:31
当然不可以。反转录酶是另一种

你确定吗,我为什么找了一篇文献说可以。但是是20年前的文章了,我也不确定啊

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7楼2016-01-16 23:43:31
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紫萸香慢001

新虫 (小有名气)

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9楼: Originally posted by xiaoweiwei121 at 2016-01-17 04:20:29
要去DNA,要用DNase I.
提RNA,有dna 污染是很普遍的
我用TRI reagent
如果放的样品很少,取上层很少的上清,还是可以避免dna污染...

请问,你提的是原核生物还是真核生物

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10楼2016-01-17 08:21:55
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紫萸香慢001

新虫 (小有名气)

引用回帖:
9楼: Originally posted by xiaoweiwei121 at 2016-01-17 04:20:29
要去DNA,要用DNase I.
提RNA,有dna 污染是很普遍的
我用TRI reagent
如果放的样品很少,取上层很少的上清,还是可以避免dna污染...

主要是我用的方案,在第一步就把ep管里的菌液给离心取沉淀了,没有取上清的步骤,所以很想跟你交流一下

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11楼2016-01-17 08:24:51
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紫萸香慢001

新虫 (小有名气)

引用回帖:
12楼: Originally posted by 原来,是这样 at 2016-01-17 09:15:21
提取RNA做不到百分百纯,绝对会混有DNA的,在进行反转录的时候必须用DNA酶消化,去除所有RNA,不知道你查的是什么文献,总之taq酶没有逆转录功能。有些反转录试剂盒里面有DNA消化酶,比如说我用的takara公司反转录 ...

嗯嗯,我也是买了专门的试剂盒,我之所以问Taq酶有没有逆转录酶作用原因是这样的,为验证无DNA污染,我将提好的mRNA用taq酶扩增相应目的片段,普通PCR跑胶结果是阳性的,每次都这样,我找不到原因,就猜想会不会taq酶也会对RNA起作用。另外,请问你做的是原核生物还是真核生物,提取的时候加了多少量,怎么验证没有DNA污染的。谢谢你啦

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14楼2016-01-17 10:27:34
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紫萸香慢001

新虫 (小有名气)

嗯嗯,谢谢你的热心解答,我看的文献只是提到Taq酶有反转录酶活性并未提及反应条件,请用你做的时候DNA酶是怎么使用的,我买了天根的和普洛麦格的试剂盒都不行啊

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17楼2016-01-18 00:06:26
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紫萸香慢001

新虫 (小有名气)

引用回帖:
16楼: Originally posted by 原来,是这样 at 2016-01-17 23:36:20
我是做植物的,提取了RNA后直接取1ugRNA先用DNase消化5分钟然后做反转录,没有做PCR验证,因为只要做了DNA消化,百分百是可以除尽DNA的,如果你不放心,那就在消化之后再做一遍PCR验证就好了,记得PCR验证之前把消 ...

也就是说你是在提完RNA,最后再用的DNA酶对吗

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18楼2016-01-18 00:09:44
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