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紫萸香慢001

新虫 (小有名气)

[交流] 求教求教:Taq酶作用???有没有人告诉我

Taq酶有没有逆转录酶的作用,比如我拿mRNA加入Taq酶,最终能合成cDNA吗。

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南有乔木张恺

木虫 (正式写手)


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当然不可以。反转录酶是另一种

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2楼2016-01-16 23:07:31
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原来,是这样

金虫 (小有名气)


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没有用的。。。去买个反转录试剂盒,反转录cDNA不仅仅需要逆转录酶,还需要在反转录之前消化一下你提取的RNA里面的DNA,这样弄出来的cDNA质量才高。

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3楼2016-01-16 23:11:30
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xiangyingliu

银虫 (小有名气)


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去买个反转录试剂盒弄,

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4楼2016-01-16 23:13:50
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紫萸香慢001

新虫 (小有名气)

你决定吗,我查的文献里面有说可以的

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5楼2016-01-16 23:36:30
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紫萸香慢001

新虫 (小有名气)

引用回帖:
3楼: Originally posted by 原来,是这样 at 2016-01-16 23:11:30
没有用的。。。去买个反转录试剂盒,反转录cDNA不仅仅需要逆转录酶,还需要在反转录之前消化一下你提取的RNA里面的DNA,这样弄出来的cDNA质量才高。

我就是用的提RNA的试剂盒,为验证没有DNA污染,我就拿提取的mRNA,用普通DNA的试剂盒扩增相应目的片段,结果还有阳性结果,这说明有DNA污染,但是我已经很注意了,不知道怎么去除DNA污染,然后我看有的文献说Taq酶有逆转录酶的作用,就怀疑,是否我的RNA没有DNA污染,只不过Taq酶也有逆转录酶作用罢了。我不清楚到底为什么,求指教。

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6楼2016-01-16 23:42:29
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紫萸香慢001

新虫 (小有名气)

引用回帖:
2楼: Originally posted by 南有乔木张恺 at 2016-01-16 23:07:31
当然不可以。反转录酶是另一种

你确定吗,我为什么找了一篇文献说可以。但是是20年前的文章了,我也不确定啊

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7楼2016-01-16 23:43:31
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南有乔木张恺

木虫 (正式写手)


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taq酶不是dna聚合酶吗?一般反转录都是用试剂盒,里面用的是mmlv逆转录酶,不会只是用taq酶这么简单吧。

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8楼2016-01-17 00:22:01
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xiaoweiwei121

荣誉版主 (文坛精英)

这潭水蓝的深邃

优秀区长优秀区长优秀版主优秀版主


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引用回帖:
6楼: Originally posted by 紫萸香慢001 at 2016-01-16 23:42:29
我就是用的提RNA的试剂盒,为验证没有DNA污染,我就拿提取的mRNA,用普通DNA的试剂盒扩增相应目的片段,结果还有阳性结果,这说明有DNA污染,但是我已经很注意了,不知道怎么去除DNA污染,然后我看有的文献说Taq酶 ...

要去DNA,要用DNase I.
提RNA,有dna 污染是很普遍的
我用TRI reagent
如果放的样品很少,取上层很少的上清,还是可以避免dna污染
9楼2016-01-17 04:20:29
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紫萸香慢001

新虫 (小有名气)

引用回帖:
9楼: Originally posted by xiaoweiwei121 at 2016-01-17 04:20:29
要去DNA,要用DNase I.
提RNA,有dna 污染是很普遍的
我用TRI reagent
如果放的样品很少,取上层很少的上清,还是可以避免dna污染...

请问,你提的是原核生物还是真核生物

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10楼2016-01-17 08:21:55
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