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紫萸香慢001

新虫 (小有名气)

[交流] 求教求教:Taq酶作用???有没有人告诉我

Taq酶有没有逆转录酶的作用,比如我拿mRNA加入Taq酶,最终能合成cDNA吗。

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原来,是这样

金虫 (小有名气)


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没有用的。。。去买个反转录试剂盒,反转录cDNA不仅仅需要逆转录酶,还需要在反转录之前消化一下你提取的RNA里面的DNA,这样弄出来的cDNA质量才高。

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3楼2016-01-16 23:11:30
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6楼: Originally posted by 紫萸香慢001 at 2016-01-16 23:42:29
我就是用的提RNA的试剂盒,为验证没有DNA污染,我就拿提取的mRNA,用普通DNA的试剂盒扩增相应目的片段,结果还有阳性结果,这说明有DNA污染,但是我已经很注意了,不知道怎么去除DNA污染,然后我看有的文献说Taq酶 ...

提取RNA做不到百分百纯,绝对会混有DNA的,在进行反转录的时候必须用DNA酶消化,去除所有RNA,不知道你查的是什么文献,总之taq酶没有逆转录功能。有些反转录试剂盒里面有DNA消化酶,比如说我用的takara公司反转录试剂盒,你要是没有的话单独去买一个消化DNA的试剂盒吧。

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12楼2016-01-17 09:15:21
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14楼: Originally posted by 紫萸香慢001 at 2016-01-17 10:27:34
嗯嗯,我也是买了专门的试剂盒,我之所以问Taq酶有没有逆转录酶作用原因是这样的,为验证无DNA污染,我将提好的mRNA用taq酶扩增相应目的片段,普通PCR跑胶结果是阳性的,每次都这样,我找不到原因,就猜想会不会ta ...

我是做植物的,提取了RNA后直接取1ugRNA先用DNase消化5分钟然后做反转录,没有做PCR验证,因为只要做了DNA消化,百分百是可以除尽DNA的,如果你不放心,那就在消化之后再做一遍PCR验证就好了,记得PCR验证之前把消化体系加热灭除DNase活性,然后再取0.5ul去做模板,如果结果为阴性,结合你没做消化结果为阳性,那样就很好像别人说明你这个的的确确去除了DNA污染。住楼主实验顺利。

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16楼2016-01-17 23:36:20
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18楼: Originally posted by 紫萸香慢001 at 2016-01-18 00:09:44
也就是说你是在提完RNA,最后再用的DNA酶对吗
...

对,试剂盒说明书好好读读,没有问题的。

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19楼2016-01-18 11:09:16
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