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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » PCR相关 » 求教求教:Taq酶作用？？？有没有人告诉我
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紫萸香慢001

新虫 (小有名气)

[交流] 求教求教:Taq酶作用？？？有没有人告诉我

Taq酶有没有逆转录酶的作用，比如我拿mRNA加入Taq酶，最终能合成cDNA吗。

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1楼 2016-01-16 21:01:53
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原来，是这样

金虫 (小有名气)
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没有用的。。。去买个反转录试剂盒，反转录cDNA不仅仅需要逆转录酶，还需要在反转录之前消化一下你提取的RNA里面的DNA，这样弄出来的cDNA质量才高。

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3楼2016-01-16 23:11:30
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6楼: Originally posted by 紫萸香慢001 at 2016-01-16 23:42:29
我就是用的提RNA的试剂盒，为验证没有DNA污染，我就拿提取的mRNA，用普通DNA的试剂盒扩增相应目的片段，结果还有阳性结果，这说明有DNA污染，但是我已经很注意了，不知道怎么去除DNA污染，然后我看有的文献说Taq酶 ...

提取RNA做不到百分百纯，绝对会混有DNA的，在进行反转录的时候必须用DNA酶消化，去除所有RNA，不知道你查的是什么文献，总之taq酶没有逆转录功能。有些反转录试剂盒里面有DNA消化酶，比如说我用的takara公司反转录试剂盒，你要是没有的话单独去买一个消化DNA的试剂盒吧。

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12楼2016-01-17 09:15:21
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14楼: Originally posted by 紫萸香慢001 at 2016-01-17 10:27:34
嗯嗯，我也是买了专门的试剂盒，我之所以问Taq酶有没有逆转录酶作用原因是这样的，为验证无DNA污染，我将提好的mRNA用taq酶扩增相应目的片段，普通PCR跑胶结果是阳性的，每次都这样，我找不到原因，就猜想会不会ta ...

我是做植物的，提取了RNA后直接取1ugRNA先用DNase消化5分钟然后做反转录，没有做PCR验证，因为只要做了DNA消化，百分百是可以除尽DNA的，如果你不放心，那就在消化之后再做一遍PCR验证就好了，记得PCR验证之前把消化体系加热灭除DNase活性，然后再取0.5ul去做模板，如果结果为阴性，结合你没做消化结果为阳性，那样就很好像别人说明你这个的的确确去除了DNA污染。住楼主实验顺利。

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16楼2016-01-17 23:36:20
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金虫 (小有名气)
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18楼: Originally posted by 紫萸香慢001 at 2016-01-18 00:09:44
也就是说你是在提完RNA，最后再用的DNA酶对吗
...

对，试剂盒说明书好好读读，没有问题的。

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19楼2016-01-18 11:09:16
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