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[求助]
细胞DNA的提取 已有2人参与
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各位大家好，最近用QIAgen的试剂盒提取细胞的DNA，结果发现OD260/280数值为2.04左右，电泳图也显示有RNA污染，于是200ul体积加入4ul（100mg/ml）的RNA酶（技术推荐的加入体积），作用了10分钟，可是结果还是和以前的一样 ，不知道该怎么办，都过去4个月了还是没有解决，网上说RNA酶作用15分钟，请各位知道的帮帮忙，谢了 |
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2楼2016-01-10 18:43:26
洛水东流: 回帖置顶 2016-01-13 13:43:10
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Advice: 1. Add 400 ul of high salt TE (1M NaCl in TE buffer) +2 ul of RNaseA (10mg/mL) 2. Incubate at 37 degrees Celsiu for one hour, mixing from time to time until the pellet dissolves 3. add 2 volume of cold 100% ethanol, put at -20 degree Celsiu for 20 minutes 4. Spin at max speed for 15 minutes 5. Wash pellet with 1ml of cold 75% ethanol 6. Spin at max speed for 5 minutes 7. Repeat wash 8. Dry pellet and resuspend in 100 ul of TE (or more, as you prefer) We can get high quality DNA with the protocol above.  3% CTAB DNA Extraction Protocol.jpg |
6楼2016-01-11 10:44:36
3楼2016-01-10 19:24:33
4楼2016-01-10 21:05:31
边木殇
木虫 (小有名气)
- 应助: 7 (幼儿园)
- 金币: 2802.2
- 散金: 10
- 红花: 4
- 帖子: 126
- 在线: 109.7小时
- 虫号: 2659652
- 注册: 2013-09-16
- 性别: GG
- 专业: 抗体工程学
5楼2016-01-11 08:46:23
7楼2016-01-11 16:14:00
8楼2016-01-11 16:19:58
9楼2016-01-13 13:41:46
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The protocol above is used to treat RAN contaminants. If you want to separate DNA from tissue cells, you should follow the protocol below. 1. Add 500 ul of pre-warmed 3% CTAB [100mM Tris-HCl, pH8.0, 25mM EDTA, 1.5M NaCl, 3%(W/V) CTAB, 1%(W/V) PVP] + 5 ul of 2-mercaptoethanol. 2. Incubate at 65 degrees Celsiu for 30 minutes. 3. Let the tubes cool down a little bit. 4. Add 500 ul of chloroform-isoamylalcohol 24:1, vortex. 5. Spin at full speed for 15 minutes. 6. Move the aqueous phase to a new tube. 7. Add 250 ul of 5M NaCl, mix. 8. Add 500 ul of cold isopropanol, mix. 9. Leave at least 20 minutes (up to overnight) at -20 degrees Celsiu. 10. Spin at max speed for 15 minutes. 11. Wash pellet with 1 ml of cold 75% ethanol. 12. Spin at max speed for 5 minutes. 13. Repeat wash. 14. Dry pellet. 15. Add 400 ul of high salt TE (1M NaCl in TE buffer) +2 ul of RNaseA (10mg/mL) 16. Incubate at 37 degrees Celsiu for one hour, mixing from time to time until the pellet dissolves 17. add 2 volume of cold 100% ethanol, put at -20 degree Celsiu for 20 minutes 18. Spin at max speed for 15 minutes 19. Wash pellet with 1ml of cold 75% ethanol 20. Spin at max speed for 5 minutes 21. Repeat wash 22. Dry pellet and resuspend in 100 ul of TE (or more, as you prefer) |
10楼2016-01-13 15:58:13