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tuhangul622

金虫 (小有名气)

[求助] 蛋白质电泳

我在分离纯化淀粉酶，提取粗酶之后，用超滤，冻干等方法浓缩了，甚至用硫酸铵沉淀了，但是跑SDS-PAGE（15%）以后没有条带，胶上除了MAKER，什么都没有，我的蛋白质浓度分别为116ug/ml,132ug/ml,142ug/ml，哪位大侠遇到过类似情况，难道这个浓度的蛋白质跑不出来吗？
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人的一生可以没有荣誉和鲜花，可不能没有自尊！
1楼 2015-12-31 15:32:58
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tiaojihaizi

银虫 (小有名气)
既然有marker，胶应该是没问题的
估计样品蛋白被降解了。你是如何知道浓度的？

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2楼2016-01-01 00:38:58
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tuhangul622

金虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by tiaojihaizi at 2016-01-01 00:38:58
既然有marker，胶应该是没问题的
估计样品蛋白被降解了。你是如何知道浓度的？

蛋白质是我从发酵液提取的粗酶液，有酶活，蛋白质含量用考马斯亮蓝法测的

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3楼2016-01-02 09:52:28
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yiyong1989

铁虫 (初入文坛)
直接用粗酶跑一下，看有没有条带

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4楼2016-01-02 15:34:43
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飞椽

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
4楼: Originally posted by yiyong1989 at 2016-01-02 15:34:43
直接用粗酶跑一下，看有没有条带

那你就做一系列对照，不同浓度都做一下，还能给你论文加一章

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5楼2016-01-02 15:41:04
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tuhangul622

金虫 (小有名气)
引用回帖:
4楼: Originally posted by yiyong1989 at 2016-01-02 15:34:43
直接用粗酶跑一下，看有没有条带

就是用粗酶跑的，没有条带，浓缩的也没有

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6楼2016-01-02 20:21:18
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tuhangul622

金虫 (小有名气)
引用回帖:
5楼: Originally posted by 飞椽 at 2016-01-02 15:41:04
那你就做一系列对照，不同浓度都做一下，还能给你论文加一章
...

我没法做不同浓度了，因为最高的浓度就是0.42mg/ml都没有条带

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7楼2016-01-02 20:22:13
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tuhangul622

金虫 (小有名气)
引用回帖:
7楼: Originally posted by tuhangul622 at 2016-01-02 20:22:13
我没法做不同浓度了，因为最高的浓度就是0.42mg/ml都没有条带
...

是0.142mg/ml,刚打错了

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8楼2016-01-02 20:25:20
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匿名

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9楼2016-01-02 21:16:46
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飞椽

新虫 (初入文坛)
我好久不做生化实验了，毕设也是做的酶活，只能从头排除，都做到电泳这里了，粗酶液里有分解淀粉酶的蛋白酶么？要分析载体了。或者提纯一下，估计用亲和层析，提纯之后再测浓度，活性，如果没问题，估计就是电压的问题。当然我说的不见得对，算是复试练兵，祝成功。

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10楼2016-01-02 22:52:36
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