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tuhangul622

金虫 (小有名气)

[求助] 蛋白质电泳

我在分离纯化淀粉酶,提取粗酶之后,用超滤,冻干等方法浓缩了,甚至用硫酸铵沉淀了,但是跑SDS-PAGE(15%)以后没有条带,胶上除了MAKER,什么都没有,我的蛋白质浓度分别为116ug/ml,132ug/ml,142ug/ml,哪位大侠遇到过类似情况,难道这个浓度的蛋白质跑不出来吗?
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tiaojihaizi

银虫 (小有名气)

既然有marker,胶应该是没问题的
估计样品蛋白被降解了。你是如何知道浓度的?

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2楼2016-01-01 00:38:58
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tuhangul622

金虫 (小有名气)

引用回帖:
2楼: Originally posted by tiaojihaizi at 2016-01-01 00:38:58
既然有marker,胶应该是没问题的
估计样品蛋白被降解了。你是如何知道浓度的?

蛋白质是我从发酵液提取的粗酶液,有酶活,蛋白质含量用考马斯亮蓝法测的

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3楼2016-01-02 09:52:28
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yiyong1989

铁虫 (初入文坛)

直接用粗酶跑一下,看有没有条带

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4楼2016-01-02 15:34:43
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飞椽

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
4楼: Originally posted by yiyong1989 at 2016-01-02 15:34:43
直接用粗酶跑一下,看有没有条带

那你就做一系列对照,不同浓度都做一下,还能给你论文加一章

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5楼2016-01-02 15:41:04
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tuhangul622

金虫 (小有名气)

引用回帖:
4楼: Originally posted by yiyong1989 at 2016-01-02 15:34:43
直接用粗酶跑一下,看有没有条带

就是用粗酶跑的,没有条带,浓缩的也没有

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6楼2016-01-02 20:21:18
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tuhangul622

金虫 (小有名气)

引用回帖:
5楼: Originally posted by 飞椽 at 2016-01-02 15:41:04
那你就做一系列对照,不同浓度都做一下,还能给你论文加一章
...

我没法做不同浓度了,因为最高的浓度就是0.42mg/ml都没有条带

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人的一生可以没有荣誉和鲜花,可不能没有自尊!
7楼2016-01-02 20:22:13
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tuhangul622

金虫 (小有名气)

引用回帖:
7楼: Originally posted by tuhangul622 at 2016-01-02 20:22:13
我没法做不同浓度了,因为最高的浓度就是0.42mg/ml都没有条带
...

是0.142mg/ml,刚打错了

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8楼2016-01-02 20:25:20
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匿名

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9楼2016-01-02 21:16:46
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飞椽

新虫 (初入文坛)

我好久不做生化实验了,毕设也是做的酶活,只能从头排除,都做到电泳这里了,粗酶液里有分解淀粉酶的蛋白酶么?要分析载体了。或者提纯一下,估计用亲和层析,提纯之后再测浓度,活性,如果没问题,估计就是电压的问题。当然我说的不见得对,算是复试练兵,祝成功。

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10楼2016-01-02 22:52:36
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