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806203391

铜虫 (小有名气)

[求助] 类风湿性关节炎的滑膜细胞提取蛋白后做western blot,就是 不出条带。求助大神。 已有1人参与

1.蛋白量足够。蛋白浓度每个上样300ug
2.胶片显影以后,就是没有条带。显影后的pvdf膜用考马斯亮蓝染色后,有很明显的蛋白条带。
3.对应marker转到膜上,颜色还很鲜艳。
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慎独。
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yang0071

木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
下次加上阳性对照

本身量表达很少
2楼2015-12-23 10:51:38
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806203391

铜虫 (小有名气)

引用回帖:
2楼: Originally posted by yang0071 at 2015-12-23 10:51:38
下次加上阳性对照

本身量表达很少

蛋白检测浓度后,然后wb每孔上样60ug。我上样上了3组,每组带一个marker。跑完,组1用考马斯亮蓝染色,如图。然后组2组3的胶用来转膜,然后组2的膜用立春红染色,如图,pvdf膜上是有marker的,由于光线问题,不是很明显。组三的用来显影,目前还没出结果,显影结束跟你讨论,谢谢。
类风湿性关节炎的滑膜细胞提取蛋白后做western blot,就是 不出条带。求助大神。
IMG_20151229_142252.jpg


类风湿性关节炎的滑膜细胞提取蛋白后做western blot,就是 不出条带。求助大神。-1
1451370522209.jpg

慎独。
3楼2015-12-29 14:30:23
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806203391

铜虫 (小有名气)

引用回帖:
2楼: Originally posted by yang0071 at 2015-12-23 10:51:38
下次加上阳性对照

本身量表达很少

您看一下图,膜上的maker还是比较明显的,但是立春红染色后并没有条带。对应分子量的marker转过来了,可是不知道为什么就没有蛋白呢。谢谢你。
慎独。
4楼2015-12-29 14:32:31
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806203391

铜虫 (小有名气)

引用回帖:
2楼: Originally posted by yang0071 at 2015-12-23 05:51:38
下次加上阳性对照

本身量表达很少

湿转。条件:恒流300mA,电压在70v上下,17min。目的蛋白分子量48。谢谢你。
慎独。
5楼2015-12-29 15:13:52
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806203391

铜虫 (小有名气)

引用回帖:
2楼: Originally posted by yang0071 at 2015-12-23 05:51:38
下次加上阳性对照

本身量表达很少

这是显影的照片。。虽然没被立春红染色成功,但是出现条带了。尽管很少。不过这应该就是转膜的问题了。。
慎独。
6楼2015-12-29 20:00:39
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806203391

铜虫 (小有名气)

引用回帖:
4楼: Originally posted by 806203391 at 2015-12-29 09:32:31
您看一下图,膜上的maker还是比较明显的,但是立春红染色后并没有条带。对应分子量的marker转过来了,可是不知道为什么就没有蛋白呢。谢谢你。...


类风湿性关节炎的滑膜细胞提取蛋白后做western blot,就是 不出条带。求助大神。-2
IMG_20151229_195715.jpg

慎独。
7楼2015-12-29 20:02:49
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ztt279

新虫 (初入文坛)

你好,你的滑膜细胞是从老鼠体内获得的吗?是小鼠还是大鼠?我的是小鼠,计划从滑膜组织中提取,但是小鼠的滑膜特别难取,可以给下建议吗?

发自小木虫Android客户端
8楼2017-10-26 23:26:41
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