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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 生物化学 » 类风湿性关节炎的滑膜细胞提取蛋白后做western blot，就是 不出条带。求助大神。
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806203391

铜虫 (小有名气)

[求助] 类风湿性关节炎的滑膜细胞提取蛋白后做western blot，就是 不出条带。求助大神。 已有1人参与

1.蛋白量足够。蛋白浓度每个上样300ug
2.胶片显影以后，就是没有条带。显影后的pvdf膜用考马斯亮蓝染色后，有很明显的蛋白条带。
3.对应marker转到膜上，颜色还很鲜艳。
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慎独。
1楼 2015-12-22 14:06:47
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yang0071

木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
下次加上阳性对照

本身量表达很少
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2楼2015-12-23 10:51:38
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806203391

铜虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by yang0071 at 2015-12-23 10:51:38
下次加上阳性对照

本身量表达很少

蛋白检测浓度后，然后wb每孔上样60ug。我上样上了3组，每组带一个marker。跑完，组1用考马斯亮蓝染色，如图。然后组2组3的胶用来转膜，然后组2的膜用立春红染色，如图，pvdf膜上是有marker的，由于光线问题，不是很明显。组三的用来显影，目前还没出结果，显影结束跟你讨论，谢谢。
类风湿性关节炎的滑膜细胞提取蛋白后做western blot，就是 不出条带。求助大神。
IMG_20151229_142252.jpg


类风湿性关节炎的滑膜细胞提取蛋白后做western blot，就是 不出条带。求助大神。-1
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慎独。
3楼2015-12-29 14:30:23
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806203391

铜虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by yang0071 at 2015-12-23 10:51:38
下次加上阳性对照

本身量表达很少

您看一下图，膜上的maker还是比较明显的，但是立春红染色后并没有条带。对应分子量的marker转过来了，可是不知道为什么就没有蛋白呢。谢谢你。
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慎独。
4楼2015-12-29 14:32:31
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806203391

铜虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by yang0071 at 2015-12-23 05:51:38
下次加上阳性对照

本身量表达很少

湿转。条件：恒流300mA，电压在70v上下，17min。目的蛋白分子量48。谢谢你。
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慎独。
5楼2015-12-29 15:13:52
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806203391

铜虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by yang0071 at 2015-12-23 05:51:38
下次加上阳性对照

本身量表达很少

这是显影的照片。。虽然没被立春红染色成功，但是出现条带了。尽管很少。不过这应该就是转膜的问题了。。
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慎独。
6楼2015-12-29 20:00:39
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806203391

铜虫 (小有名气)
引用回帖:
4楼: Originally posted by 806203391 at 2015-12-29 09:32:31
您看一下图，膜上的maker还是比较明显的，但是立春红染色后并没有条带。对应分子量的marker转过来了，可是不知道为什么就没有蛋白呢。谢谢你。...

。
类风湿性关节炎的滑膜细胞提取蛋白后做western blot，就是 不出条带。求助大神。-2
IMG_20151229_195715.jpg
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慎独。
7楼2015-12-29 20:02:49
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ztt279

新虫 (初入文坛)
你好，你的滑膜细胞是从老鼠体内获得的吗？是小鼠还是大鼠？我的是小鼠，计划从滑膜组织中提取，但是小鼠的滑膜特别难取，可以给下建议吗？

发自小木虫Android客户端
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8楼2017-10-26 23:26:41
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