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胶原诱导性关节炎（Collagen-induced arthritis，CIA）是目前公认的RA的最佳动物模型，特别是在治疗机制及免疫反应有关的研究中，CIA模型的优点将为研究者提供极大帮助，因此我们选用Ⅱ型胶原免疫作为制作RA动物模型的载体因素。在长期的研究中，我们课题组对CIA模型制作积累了丰富的经验，目前在CIA模型的制作方面处于国内领先水平。本实验结果显示，CIA大鼠免疫10d起相继出现踝关节肿胀，行动迟缓、跛行；光镜下观察发现CIA大鼠踝关节有明显的滑膜组织增生，滑膜细胞增生呈的乳头状，滑膜组织内见有扩张的血管及新生毛细血管及成纤维细胞，并伴有淋巴细胞侵润。各关节软骨的基质及软骨细胞出现不同程度的退行性，严重处软骨坏死剥脱，变性、坏死剥脱的软骨表面，可见由滑膜细胞和毛细血管增生所形成的血管翳，血管翳侵袭到软骨下，可见不同程度的骨破坏；膝关节腔内可见滑膜组织增生，血管翳形成，关节软骨见有不同程度的退行性变及骨质的破坏；并且与正常对照组大鼠相比，大鼠血浆抗Ⅱ型胶原抗体、IL-6、IL-10及IFN-γ等炎症因子的水平明显升高，从而反映本实验制作的CIA模型的可靠性，能够满足RA模型的要求。 RA属中医学“痹证”范畴，许多研究表明脾虚与RA的中医病机、临床表现亦密切相关。中医理论认为脾胃虚弱，饮食失调，起居失常，可致痰湿内生，湿浊为患，复感外邪而致痹，如《素问•痹论篇第四十三》指出：“饮食居处为其病本。”明代医家汪蕴谷在《杂症会心录•痹论》中强调补脾土的重要性。从脾论治作亦是中医药治疗RA的重要法则，不但取得了明显的临床疗效，而且具有一定的实验基础[8-9]，故又有人提出“脾虚是痹证的发病之本”[10]。辨证论治，是中医认识疾病和治疗疾病的基本原则，是中医学对疾病的一种特殊的研究和处理方法，也是中医临床的基本特点。而CIA模型是没有联系中医病因病机学说的动物疾病模型，在探索中医辨证论治及评价中药疗效的等问题上存在一定的局限性。目前对于脾虚证RA动物模型的制作与评价研究工作开展的较少，而这部分研究工作对中医证候等方面或有突破作用，在中医药治疗类风湿性关节炎疗效研究的评价或具有重要的作用，因此我们开展此方面的研究。 目前有多种制作脾虚动物模型的方法，如：用泻下法、饮食失节法、耗气破气法、劳倦过度法、过劳加饥饱失常法、劳倦过度加饮食不节法、利血平法等多种方法制作脾虚动物模型[4,11-14]。在众多脾虚造模的方法中，利血平塑造脾虚证模型出现的各种虚弱症状与临床脾虚症状十分相似，且具有条件易控制、模型较稳定之特点，是制备脾虚模型的经典方法之一。本实验应用利血平制作的脾虚证CIA动物模型，除关节明显红肿外，且出现与临床脾虚证RA相似的改变，具体表现在：（1）动物行为学特征：大鼠精神萎靡，眯眼，被毛枯疏无光泽，弓背蜷缩，踝关节红肿，倦怠、懒动，喜聚堆，饮食减少，体重下降，稀便等症状，十分接近中医脾虚证的症状特点，可以作为脾虚证的模型加以使用和研究。（2）现代检测指标印证：①利血平制作的脾虚证CIA大鼠小肠绒毛排列紊乱，数量减少，长短、宽窄不一，被覆上皮可见有多量杯状细胞，肠腔内可见多量剥脱、退变、坏死的绒毛碎片。坏死组织内见有炎细胞浸润，肠腔内可见剥脱；②与正常对照组相比，ConA刺激下CIA组大鼠T细胞增殖能力和LPS刺激后B细胞增殖能较明显升高，说明CIA大鼠细胞免疫与体液免疫明显增强。利血平CIA组大鼠T细胞和B细胞功能功能较CIA大鼠明显下降，虽无统计学意义，可能是由于利血平（脾虚）虽可引起免疫功能的下降，但并不能对抗这种免疫功能亢进的状态；③CIA组大鼠外周血中CD3+细胞、CD4+细胞、CD8+细胞百分比与正常对照组相比，无显著性差异，但CD4/CD8明显升高；与CIA组相比，利血平CIA组CD3+细胞、CD4+细胞明显下降，CD8+细胞百分比和CD4/CD8无明显变化，可能是由于CIA大鼠机体处于免疫功能的亢进状态，利血平（脾虚）虽可引起免疫功能的下降，但亦不能调整这种免疫功能亢进的状态。这些均与脾虚证特异性病理变化相符合，说明在此CIA大鼠中存在一定的脾虚状态。除此之外，我们还检测了RA的相关指标，结果显示：脾虚证CIA大鼠与对照CIA大鼠相比，关节肿胀度与关节病理损伤程度加重，抗Ⅱ型胶原抗体、IL-10水平升高，这些指标的改变，从一定程度上表明脾虚能加重RA的发生发展，在RA的发生发展中起着重要的作用，这与中医理论与临床观察相符合。 本课题组对利血平制作的脾虚动物模型，已经有一定的研究基础[4,15-17]，发现用利血平制作脾虚动物模型，动物出现了利血平CIA组大鼠精神萎靡，眯眼，被毛枯疏无光泽，弓背蜷缩，倦怠、懒动，喜聚堆，食欲下降，体重下降，稀便等症状，十分接近中医脾虚证的症状特点。本实验结果与其相一致，说明利血平方法制作的脾虚动物模型稳定性较好。实验结果表明，采用利血平方法制作的脾虚证RA动物模型，既有明显的脾虚症状，又有明显的RA特征，说明这种脾虚证RA病证结合模型，能够部份反映脾虚证RA病人的发病特点，具有可行性，利血平法制作的脾虚证CIA大鼠模型可以为RA脾虚证病证结合动物模型提供一个有益的参考。 本文中所论及的采用不同方法制作的脾虚证的RA病证结合动物模型，是结合现代研究成果，并在中医理论指导下而提出来的，肯定存在不足之处，要造出理想的中医病证结合动物模型，得到学界的公认，目前还有很大的难度。希望能本研究能对CIA病证结合动物模型的研究及中医治疗方法、治疗机理的深入探讨，起到抛砖引玉的作用。 |
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jeangong
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【答案】应助回帖
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Mally89: 金币+1 2012-05-07 16:56:16
Mally89: 金币+1 2012-05-07 16:56:16
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Collagen-induced arthritis (Collagen-induced arthritis, the CIA) is now recognized as the best animal models of RA, especially in the treatment mechanism and the immune response, the CIA model has the advantage will provide researchers with a great help,Therefore, we selected the type II collagen immunization as a carrier of factors of production of RA animal models. Long-term study of our group on the CIA model-making has accumulated a wealth of experience in the domestic leading level in the production of the CIA model. The results suggest that have appeared in the CIA rat immune 10d ankle swelling, slow, limp; light microscope CIA rat ankle joint synovial tissue, synovial cell hyperplasia were papillary, slip the membrane see the expansion of blood vessels and new blood capillaries and fibroblasts, accompanied by lymphocyte infiltration. Of the articular cartilage matrix and cartilage cells with varying degrees of degenerative exfoliative serious at the cartilage necrosis, degeneration and necrosis of the exfoliative the cartilage surface, showing that formed by the synovial cells and capillary proliferation, pannus, pannus invasion into subchondral visible to varying degrees of bone destruction; knee joint cavities in synovial tissue hyperplasia, pannus formation, articular cartilage degeneration and bone destruction see there are different degrees; and compared with normal control rats, rats plasma anti-type II collagen antibody, IL-6, IL-10 and IFN-γ and other inflammatory factor levels were significantly increased, to reflect the reliability of the CIA model produced in this experiment, to meet the requirements of the RA model. 太长了，太费时了！！！先翻译到这里。 |
2楼2012-04-24 14:24:50
