应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 生物化学 » 请教一个酵母单杂交的问题
北京石油化工学院2026年研究生招生接收调剂公告
191/2返回列表12下一页
查看: 13608  |  回复: 18
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看

1002432022

版主

优秀！！有木有！！！优秀！！有木有！！！优秀！！有木有！！！优秀！！有木有！！！

[求助] 请教一个酵母单杂交的问题 已有2人参与

最近做单杂实验发现一个怪问题，我做点对点的。我把要验证的转录因子构建到pGADT7-rec2载体上，与pHis2的空载共同转化Y187，本来要拿这个做阴性对照的，可是在三缺板子上长得很欢乐呀，加了3AT，并且已经加的浓度很高了，还是生长！但是我的实验组，就是转录因子构建到pGADT7-rec2载体上，目标启动子构建到pHis2载体上共同转化Y187，在三缺板上长，加了3AT之后反倒不长了！有没有大神遇到过类似问题，或者帮忙解释一下？
还有一点，我看了pHIS2的序列，在HIS3前面，Pmin区域里也有我的转录因子结合位点，会不会是我的转录因子结合到那里去了？不知道有没有这个可能性啊？这个minimum promoter是不是只有GAL4AD才能结合呢？如果非要做，这段区域能不能改造呢？求指点啊~
还有，我也试过了pAbAi系统的，一样的问题，只转了空载pAbAi，然后再把我的转录因子构建在pGADT7上，转化，AbA已经加到3ug/ml了，还是生长！求指点这种激活空载的问题怎么解决啊~~~
回复此楼

» 收录本帖的淘帖专辑推荐

生物科学系列

» 猜你喜欢
1楼 2015-12-21 12:15:16
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
回帖支持 ( 显示支持度最高的前 50 名 )

1002432022

兑换贵宾

优秀！！有木有！！！优秀！！有木有！！！优秀！！有木有！！！优秀！！有木有！！！
引用回帖:
5楼: Originally posted by hmgder at 2016-03-03 20:06:26
刚刚开始准备做酵母杂交，有两个小问题想请教大家
1. 酵母转化过程中没有抗生素，全程要在无菌台操作吗？那水浴和离心过程怎么办呢
2. 不知道你们用电转化还是醋酸锂，化学转化30度水浴紧接着就是42度水浴，要准备 ...

酵母不用抗生素，所以操作要十分小心，因为很容易污染。离心只要盖好离心管盖子拿出来离心就好了，水浴一样的。

发自小木虫Android客户端
赞一下(1人) 回复此楼
6楼2016-03-03 23:54:37
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

qingxiong

主管区长

优秀！！有木有！！！优秀！！有木有！！！优秀！！有木有！！！优秀！！有木有！！！
我也遇到了跟你一样的问题，不知道楼主是否解决
赞一下(1人) 回复此楼
12楼2018-08-03 08:49:26
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
普通回帖

piaoyidetian

管理员

优秀！！有木有！！！优秀！！有木有！！！优秀！！有木有！！！优秀！！有木有！！！
我准备开始做酵母单杂交，但是启动子区域的选择想请教一下？是选取ATG上游2000的片段，然后整个连到pHIS2载体上吗？
赞一下 回复此楼
2楼2016-01-14 15:29:38
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

1002432022

管理员

优秀！！有木有！！！优秀！！有木有！！！优秀！！有木有！！！优秀！！有木有！！！
引用回帖:
2楼: Originally posted by piaoyidetian at 2016-01-14 15:29:38
我准备开始做酵母单杂交，但是启动子区域的选择想请教一下？是选取ATG上游2000的片段，然后整个连到pHIS2载体上吗？

我之前做了直接取ATG上游1.5k构建到phis2上，感觉不合适。最好还是找到自己转录因子的结合motif然后取motif和其上下游几十bp的片段，然后串联3个片段构建载体比较合适。
赞一下 回复此楼
3楼2016-02-04 19:53:25
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

张凡云

兑换贵宾

优秀！！有木有！！！优秀！！有木有！！！优秀！！有木有！！！优秀！！有木有！！！
我们用的AH109菌株，载体是pBridge，所以木有遇到你说的这些问题

发自小木虫IOS客户端
赞一下 回复此楼
4楼2016-02-05 08:42:12
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

hmgder

管理员

优秀！！有木有！！！优秀！！有木有！！！优秀！！有木有！！！优秀！！有木有！！！
刚刚开始准备做酵母杂交，有两个小问题想请教大家
1. 酵母转化过程中没有抗生素，全程要在无菌台操作吗？那水浴和离心过程怎么办呢
2. 不知道你们用电转化还是醋酸锂，化学转化30度水浴紧接着就是42度水浴，要准备两个水浴锅吗

问题很傻，谢谢你们的解答~
赞一下 回复此楼
5楼2016-03-03 20:06:26
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

1002432022

超级版主

优秀！！有木有！！！优秀！！有木有！！！优秀！！有木有！！！优秀！！有木有！！！
引用回帖:
5楼: Originally posted by hmgder at 2016-03-03 20:06:26
刚刚开始准备做酵母杂交，有两个小问题想请教大家
1. 酵母转化过程中没有抗生素，全程要在无菌台操作吗？那水浴和离心过程怎么办呢
2. 不知道你们用电转化还是醋酸锂，化学转化30度水浴紧接着就是42度水浴，要准备 ...

我们用的醋酸锂，30度放在培养箱就好了，反正酵母要30度培养嘛！另外，我们实验室现在水浴的操作基本都改成恒温金属浴了，调节温度很快，就不需要搞两个水浴锅什么的了。

发自小木虫Android客户端
赞一下 回复此楼
7楼2016-03-03 23:59:09
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

hmgder

实习版主

优秀！！有木有！！！优秀！！有木有！！！优秀！！有木有！！！优秀！！有木有！！！
引用回帖:
7楼: Originally posted by 1002432022 at 2016-03-03 23:59:09
我们用的醋酸锂，30度放在培养箱就好了，反正酵母要30度培养嘛！另外，我们实验室现在水浴的操作基本都改成恒温金属浴了，调节温度很快，就不需要搞两个水浴锅什么的了。
...

太感谢你了~
总感觉恒温箱温度不太准呢。。
那从恒温箱到水浴锅这段距离要放在冰上吗，还是说没有那么严格，室温就好呢
还有想问，感受态细胞如果不转质粒，能像大肠杆菌一样直接复苏吗，具体怎么操作呢
赞一下 回复此楼
8楼2016-03-04 11:18:33
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

1002432022

超级版主

优秀！！有木有！！！优秀！！有木有！！！优秀！！有木有！！！优秀！！有木有！！！
引用回帖:
8楼: Originally posted by hmgder at 2016-03-04 11:18:33
太感谢你了~
总感觉恒温箱温度不太准呢。。
那从恒温箱到水浴锅这段距离要放在冰上吗，还是说没有那么严格，室温就好呢
还有想问，感受态细胞如果不转质粒，能像大肠杆菌一样直接复苏吗，具体怎么操作呢...

不用放冰上，酵母感受态现做现用，不保存的。

发自小木虫Android客户端
赞一下 回复此楼
9楼2016-03-05 12:12:12
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

寒冰利剑

管理员

优秀！！有木有！！！优秀！！有木有！！！优秀！！有木有！！！优秀！！有木有！！！
你好，我最近也在做酵母单杂交，用的是y187，之前实验室可能把酵母菌污染了，之后划线，酵母菌落长得很快，菌落形态不太一样，因此，想问问酵母单杂可不可以用AH109，质粒用的是PGADT 7和phis 2载体。

发自小木虫Android客户端
赞一下 回复此楼
岂能尽如人意，但求无愧我心。
10楼2016-11-26 11:03:42
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 1002432022 的主题更新
191/2返回列表12下一页
普通表情 龙 兔 虎 猫
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 求调剂推荐 材料 304 +21 荷包蛋hyj 2026-03-26 21/1050 2026-04-01 21:09 by lijunpoly
[考研] 材料调剂 +9 一样YWY 2026-03-31 9/450 2026-04-01 21:07 by 赖春艳
[考研] 085601材料工程找调剂 +20 oatmealR 2026-03-29 21/1050 2026-04-01 21:00 by lijunpoly
[考研] 286求调剂 +5 Sa67890. 2026-04-01 7/350 2026-04-01 19:50 by 6781022
[考研] 085600 一志愿9 总分351 求调剂学校 +7 czhcz 2026-03-31 9/450 2026-04-01 19:24 by 无际的草原
[考研] 337求调剂 +9 《树》 2026-03-29 9/450 2026-04-01 18:05 by 记事本2026
[考研] 【求调剂】085601材料工程专硕 | 总分272 | +10 脚滑的守法公民 2026-03-27 10/500 2026-04-01 17:23 by pies112
[考研] 26考研调剂 +3 Wnz.20030617 2026-04-01 3/150 2026-04-01 17:22 by salamander`
[考研] 285求调剂 +7 AZMK 2026-03-30 13/650 2026-04-01 17:00 by 七度不信任
[考研] 311求调剂 +11 蓝月亮亮 2026-03-30 11/550 2026-04-01 16:33 by 七度不信任
[考研] 化学308分调剂 +13 你好明天你好 2026-03-30 14/700 2026-04-01 16:19 by yanflower7133
[考研] 求调剂 +4 DADA怪 2026-03-31 4/200 2026-04-01 14:30 by ZXlzxl0425
[考研] 一志愿武理材料工程302调剂环化或化工 +15 Doleres 2026-03-31 16/800 2026-04-01 09:49 by lfj11
[考研] 0856 335分 | 封装or激光加工 老师看看我！！ +9 cccchenso 2026-03-29 9/450 2026-03-31 16:37 by lishahe
[考研] 293分求调剂，外语为俄语 +5 加一一九 2026-03-31 5/250 2026-03-31 09:39 by zhshch
[考研] 297 地理学070500 复试求调剂 +3 小圆圈圈ooo 2026-03-30 3/150 2026-03-30 21:05 by 余震yz
[考研] 322求调剂 +10 宋明欣 2026-03-27 10/500 2026-03-30 18:47 by 544594351
[考研] 070305高分子化学与物理 304分求调剂 +12 c297914 2026-03-28 12/600 2026-03-29 16:21 by Serene1974
[考研] 308求调剂 +7 墨墨漠 2026-03-27 7/350 2026-03-28 07:43 by 热情沙漠
[考研] 调剂求收留 +7 果然有我 2026-03-26 7/350 2026-03-27 00:26 by wxiongid
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭