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1002432022金虫 (小有名气)
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[求助]
请教一个酵母单杂交的问题 已有2人参与
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最近做单杂实验发现一个怪问题，我做点对点的。我把要验证的转录因子构建到pGADT7-rec2载体上，与pHis2的空载共同转化Y187，本来要拿这个做阴性对照的，可是在三缺板子上长得很欢乐呀，加了3AT，并且已经加的浓度很高了，还是生长！但是我的实验组，就是转录因子构建到pGADT7-rec2载体上，目标启动子构建到pHis2载体上共同转化Y187，在三缺板上长，加了3AT之后反倒不长了！有没有大神遇到过类似问题，或者帮忙解释一下？ 还有一点，我看了pHIS2的序列，在HIS3前面，Pmin区域里也有我的转录因子结合位点，会不会是我的转录因子结合到那里去了？不知道有没有这个可能性啊？这个minimum promoter是不是只有GAL4AD才能结合呢？如果非要做，这段区域能不能改造呢？求指点啊~ 还有，我也试过了pAbAi系统的，一样的问题，只转了空载pAbAi，然后再把我的转录因子构建在pGADT7上，转化，AbA已经加到3ug/ml了，还是生长！求指点这种激活空载的问题怎么解决啊~~~ |
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我们用的醋酸锂，30度放在培养箱就好了，反正酵母要30度培养嘛！另外，我们实验室现在水浴的操作基本都改成恒温金属浴了，调节温度很快，就不需要搞两个水浴锅什么的了。 发自小木虫Android客户端 |
7楼2016-03-03 23:59:09
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你好，我最近也在做酵母单杂交，用的是y187，之前实验室可能把酵母菌污染了，之后划线，酵母菌落长得很快，菌落形态不太一样，因此，想问问酵母单杂可不可以用AH109，质粒用的是PGADT 7和phis 2载体。 发自小木虫Android客户端 |
10楼2016-11-26 11:03:42