24小时热门版块排行榜    

Znn3bq.jpeg
汕头大学海洋科学接受调剂
查看: 13671  |  回复: 18
当前只显示满足指定条件的回帖,点击这里查看本话题的所有回帖

1002432022

金虫 (小有名气)

[求助] 请教一个酵母单杂交的问题 已有2人参与

最近做单杂实验发现一个怪问题,我做点对点的。我把要验证的转录因子构建到pGADT7-rec2载体上,与pHis2的空载共同转化Y187,本来要拿这个做阴性对照的,可是在三缺板子上长得很欢乐呀,加了3AT,并且已经加的浓度很高了,还是生长!但是我的实验组,就是转录因子构建到pGADT7-rec2载体上,目标启动子构建到pHis2载体上共同转化Y187,在三缺板上长,加了3AT之后反倒不长了!有没有大神遇到过类似问题,或者帮忙解释一下?
还有一点,我看了pHIS2的序列,在HIS3前面,Pmin区域里也有我的转录因子结合位点,会不会是我的转录因子结合到那里去了?不知道有没有这个可能性啊?这个minimum promoter是不是只有GAL4AD才能结合呢?如果非要做,这段区域能不能改造呢?求指点啊~
还有,我也试过了pAbAi系统的,一样的问题,只转了空载pAbAi,然后再把我的转录因子构建在pGADT7上,转化,AbA已经加到3ug/ml了,还是生长!求指点这种激活空载的问题怎么解决啊~~~
回复此楼
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

张凡云

至尊木虫 (职业作家)

我们用的AH109菌株,载体是pBridge,所以木有遇到你说的这些问题

发自小木虫IOS客户端
4楼2016-02-05 08:42:12
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 19 个回答

piaoyidetian

新虫 (初入文坛)

我准备开始做酵母单杂交,但是启动子区域的选择想请教一下?是选取ATG上游2000的片段,然后整个连到pHIS2载体上吗?
2楼2016-01-14 15:29:38
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

1002432022

金虫 (小有名气)

引用回帖:
2楼: Originally posted by piaoyidetian at 2016-01-14 15:29:38
我准备开始做酵母单杂交,但是启动子区域的选择想请教一下?是选取ATG上游2000的片段,然后整个连到pHIS2载体上吗?

我之前做了直接取ATG上游1.5k构建到phis2上,感觉不合适。最好还是找到自己转录因子的结合motif然后取motif和其上下游几十bp的片段,然后串联3个片段构建载体比较合适。
3楼2016-02-04 19:53:25
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

hmgder

新虫 (初入文坛)

刚刚开始准备做酵母杂交,有两个小问题想请教大家
1. 酵母转化过程中没有抗生素,全程要在无菌台操作吗?那水浴和离心过程怎么办呢
2. 不知道你们用电转化还是醋酸锂,化学转化30度水浴紧接着就是42度水浴,要准备两个水浴锅吗

问题很傻,谢谢你们的解答~
5楼2016-03-03 20:06:26
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 求调剂学校 +13 不会吃肉 2026-04-13 15/750 2026-04-15 12:49 by 西北望—风沙
[考研] 291分调剂 +8 上岸小莹加油 2026-04-09 9/450 2026-04-15 00:41 by zzzggc
[考研] 求助调剂,跨调 +18 X十甫寸Y 2026-04-11 19/950 2026-04-14 19:26 by Art1977
[考研] 327求调剂 +23 Xxjc1107. 2026-04-13 25/1250 2026-04-14 18:48 by 逍遥三郎
[考研] 085404 22408 309分求调剂 +7 lzmk 2026-04-14 7/350 2026-04-14 17:02 by lihaoda1994
[考研] 化学070300 求调剂 +23 哈哈哈^_^ 2026-04-12 23/1150 2026-04-14 16:30 by zhouxiaoyu
[教师之家] 转长聘了 +7 简单化xn 2026-04-13 7/350 2026-04-14 14:50 by xindong
[考研] 农学0904 312求调剂 +4 Say Never 2026-04-11 4/200 2026-04-14 09:10 by zs92450
[考研] 机械还有还有名额吗?太难了 +8 笑笑袁 2026-04-10 8/400 2026-04-14 08:44 by screening
[考研] 303求调剂 +14 SereinQ 2026-04-10 15/750 2026-04-11 20:43 by 蓝云思雨
[考研] 085400 328分 求调剂 +10 喂你一个大橙子 2026-04-09 14/700 2026-04-11 19:53 by lqspecial
[考研] 283求调剂 +22 那个噜子 2026-04-09 22/1100 2026-04-11 10:41 by 逆水乘风
[考研] 288求调剂 +15 代fish 2026-04-09 16/800 2026-04-11 10:26 by wwj2530616
[考研] 275求调剂 +9 1624447980 2026-04-08 10/500 2026-04-11 10:20 by Delta2012
[考研] 调剂 +12 卷卷卷心菜_ 2026-04-09 13/650 2026-04-10 22:36 by Ftglcn90
[考研] 调剂 +19 小张ZA 2026-04-10 20/1000 2026-04-10 22:08 by 猪会飞
[考研] 368求调剂 +3 17385968172 2026-04-10 3/150 2026-04-10 20:12 by 电子奥德彪
[考研] 计算机类求调剂,22408-274分 +7 上岸de小虫 2026-04-09 8/400 2026-04-10 19:56 by fxue1114
[考研] 0860004 求调剂 309分 +6 Yin DY 2026-04-09 6/300 2026-04-09 10:19 by 啊李999
[考研] 085404,334分,求调剂 +5 sunjie8888 2026-04-08 8/400 2026-04-09 07:26 by sunjie8888
信息提示
请填处理意见