应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 生物化学 » 请教一个酵母单杂交的问题
51/1返回列表
查看: 13568  |  回复: 18
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看
当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖

1002432022

金虫 (小有名气)

[求助] 请教一个酵母单杂交的问题 已有2人参与

最近做单杂实验发现一个怪问题，我做点对点的。我把要验证的转录因子构建到pGADT7-rec2载体上，与pHis2的空载共同转化Y187，本来要拿这个做阴性对照的，可是在三缺板子上长得很欢乐呀，加了3AT，并且已经加的浓度很高了，还是生长！但是我的实验组，就是转录因子构建到pGADT7-rec2载体上，目标启动子构建到pHis2载体上共同转化Y187，在三缺板上长，加了3AT之后反倒不长了！有没有大神遇到过类似问题，或者帮忙解释一下？
还有一点，我看了pHIS2的序列，在HIS3前面，Pmin区域里也有我的转录因子结合位点，会不会是我的转录因子结合到那里去了？不知道有没有这个可能性啊？这个minimum promoter是不是只有GAL4AD才能结合呢？如果非要做，这段区域能不能改造呢？求指点啊~
还有，我也试过了pAbAi系统的，一样的问题，只转了空载pAbAi，然后再把我的转录因子构建在pGADT7上，转化，AbA已经加到3ug/ml了，还是生长！求指点这种激活空载的问题怎么解决啊~~~
回复此楼

» 收录本帖的淘帖专辑推荐

生物科学系列

» 猜你喜欢
1楼 2015-12-21 12:15:16
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

1002432022

金虫 (小有名气)
引用回帖:
5楼: Originally posted by hmgder at 2016-03-03 20:06:26
刚刚开始准备做酵母杂交，有两个小问题想请教大家
1. 酵母转化过程中没有抗生素，全程要在无菌台操作吗？那水浴和离心过程怎么办呢
2. 不知道你们用电转化还是醋酸锂，化学转化30度水浴紧接着就是42度水浴，要准备 ...

酵母不用抗生素，所以操作要十分小心，因为很容易污染。离心只要盖好离心管盖子拿出来离心就好了，水浴一样的。

发自小木虫Android客户端
赞一下(1人) 回复此楼
6楼2016-03-03 23:54:37
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 19 个回答

piaoyidetian

新虫 (初入文坛)
我准备开始做酵母单杂交，但是启动子区域的选择想请教一下？是选取ATG上游2000的片段，然后整个连到pHIS2载体上吗？
赞一下 回复此楼
2楼2016-01-14 15:29:38
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

1002432022

金虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by piaoyidetian at 2016-01-14 15:29:38
我准备开始做酵母单杂交，但是启动子区域的选择想请教一下？是选取ATG上游2000的片段，然后整个连到pHIS2载体上吗？

我之前做了直接取ATG上游1.5k构建到phis2上，感觉不合适。最好还是找到自己转录因子的结合motif然后取motif和其上下游几十bp的片段，然后串联3个片段构建载体比较合适。
赞一下 回复此楼
3楼2016-02-04 19:53:25
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

张凡云

至尊木虫 (职业作家)
我们用的AH109菌株，载体是pBridge，所以木有遇到你说的这些问题

发自小木虫IOS客户端
赞一下 回复此楼
4楼2016-02-05 08:42:12
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 19 个回答
普通表情 龙 兔 虎 猫
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 299求调剂 +4 △小透明* 2026-03-17 4/200 2026-03-17 20:09 by peike
[考研] 274求调剂0856材料化工 +13 z2839474511 2026-03-11 14/700 2026-03-17 16:51 by share_joy
[考研] 211本，11408一志愿中科院277分，曾在中科院自动化所实习 +6 Losir 2026-03-12 7/350 2026-03-17 12:09 by danranxie
[论文投稿] 有没有大佬发小论文能带我个二作 +3 增锐漏人 2026-03-17 4/200 2026-03-17 09:26 by xs74101122
[考研] 286求调剂 +3 lemonzzn 2026-03-16 5/250 2026-03-16 20:43 by lemonzzn
[考研] 304求调剂 +4 ahbd 2026-03-14 4/200 2026-03-16 16:48 by 我的船我的海
[考研] 0703一志愿211 285分求调剂 +5 ly3471z 2026-03-13 5/250 2026-03-16 16:16 by 哦哦123
[考研] 0703化学调剂 290分有科研经历，论文在投 +7 腻腻gk 2026-03-14 7/350 2026-03-16 10:12 by houyaoxu
[考研] 求老师收留调剂 +4 jiang姜66 2026-03-14 5/250 2026-03-15 20:11 by Winj1e
[考研] 机械专硕调剂 +3 笨笨兔子 2026-03-12 3/150 2026-03-15 20:02 by 栗子粥?
[基金申请] 现在如何回避去年的某一个专家，不知道名字 +3 zk200107 2026-03-12 6/300 2026-03-14 17:13 by zk200107
[考研] 255求调剂 +3 李嘉慧， 2026-03-12 4/200 2026-03-14 16:58 by 有只狸奴
[考研] 328求调剂 +3 5201314Lsy！ 2026-03-13 6/300 2026-03-14 15:31 by hyswxzs
[考研] 297求调剂 +4 学海漂泊 2026-03-13 4/200 2026-03-14 11:51 by 热情沙漠
[考研] 【0703化学调剂】-一志愿华中师范大学-六级475 +5 Becho359 2026-03-11 5/250 2026-03-14 11:35 by 哦哦123
[基金申请] 有必要更换申报口吗 20+3 fannyamoy 2026-03-11 3/150 2026-03-14 00:52 by zhanghaozhu
[考研] 求材料调剂 +5 隔壁陈先生 2026-03-12 5/250 2026-03-13 22:03 by 星空星月
[考研] （081700）化学工程与技术-298分求调剂 +12 11啦啦啦 2026-03-11 35/1750 2026-03-13 21:25 by JourneyLucky
[考研] 289求调剂 +3 李政莹 2026-03-12 3/150 2026-03-13 11:02 by 求调剂zz
[考博] 2026年博士申请 +3 QwQwQW10 2026-03-11 3/150 2026-03-12 17:58 by gxch43
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭