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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » PCR相关 » 新人求助分析图~~
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mulezy

新虫 (初入文坛)

[交流] 新人求助分析图~~ 已有3人参与

marker后1 2 孔用的是同一种引物，为什么条带位置不一样？ 并且4 5 6孔可能出现两个条带都是引物二聚体吗？如果不是二聚体，条带的位置跟我的目的基因位置也不符合。7 8 两孔看起来是引物二聚体，可是9为什么没有二聚体？并且条带位置跟我的目的基因位置是符合的！ 很不解，请求回答~  每三个孔分别是阳性对照，样品，阴性对照。

新人求助分析图~~
IMG_2179.JPG
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1楼 2015-12-20 23:49:50
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SorryJ

银虫 (小有名气)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
怎么感觉你阴性也跑出条带了？

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2楼2015-12-20 23:58:57
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mulezy

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
2楼: Originally posted by SorryJ at 2015-12-20 23:58:57
怎么感觉你阴性也跑出条带了？

我也感觉有条带，但是估计是引物特异性不好。。我纠结的是前面两个条带 位置不一样。。。
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3楼2015-12-23 15:59:29
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SorryJ

银虫 (小有名气)
★
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引用回帖:
3楼: Originally posted by mulezy at 2015-12-23 15:59:29
我也感觉有条带，但是估计是引物特异性不好。。我纠结的是前面两个条带 位置不一样。。。...

如果阴性有条带说明你东西污染了呀。重新做一次看看，PCR就是这么恶心人。

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4楼2015-12-23 16:27:08
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zynjxzc

铜虫 (小有名气)
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你跑胶跑得不好，相同产物条带的位置也会出现差异的，再说看你的Marker，跑得确实不好看
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好好把这个课题做好
5楼2015-12-24 14:34:09
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足下客

木虫 (正式写手)
★
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Marker都没有跑开，你的胶浓度时多大？目的基因的大小？
阴性对照也跑出条带，肯定是有污染。
排除污染的情况下，跑的条带还不对，就要换引物了。可能是引物特异性不行。你的引物退火温度是多少？PCR反应条件是怎样的？
很多细节都不知道，光看图也难以下结论
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6楼2015-12-24 14:44:22
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mulezy

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
6楼: Originally posted by 足下客 at 2015-12-24 14:44:22
Marker都没有跑开，你的胶浓度时多大？目的基因的大小？
阴性对照也跑出条带，肯定是有污染。
排除污染的情况下，跑的条带还不对，就要换引物了。可能是引物特异性不行。你的引物退火温度是多少？PCR反应条件是怎 ...

退火60度  我想知道的是同一种引物可能位置不太一样么？  marker没有跑开估计跟我的电泳槽有关，有点接触不良，导致电阻变大，有这种可能么？
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7楼2015-12-24 20:26:48
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足下客

木虫 (正式写手)
★
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引用回帖:
7楼: Originally posted by mulezy at 2015-12-24 20:26:48
退火60度  我想知道的是同一种引物可能位置不太一样么？  marker没有跑开估计跟我的电泳槽有关，有点接触不良，导致电阻变大，有这种可能么？...

引物的特异性不好，是会出现扩增条带不一样的，有时候会扩出非目的条带。也可能是marker的质量不好，或者是胶浓度太大，或者是跑的电压过大都会跑不开
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8楼2015-12-25 08:36:08
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