24小时热门版块排行榜    

北京石油化工学院2026年研究生招生接收调剂公告
查看: 3154  |  回复: 11

zealoushebe

木虫 (初入文坛)

[求助] 提取动物DNA样品,260/280偏低,怎么纯化? 已有2人参与

我在做DNA条形码研究,用天根试剂盒提取昆虫类动物DNA样品,超微量紫外测定结果2260/280普遍低于1.80。怀疑有蛋白质污染,这样的DNA能不能用于普通PCR扩增?我的DNA样品大概有50μL,有没有什么办法纯化一下呢?
回复此楼
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
回帖支持 ( 显示支持度最高的前 50 名 )

uulovelyuu

至尊木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
zealoushebe: 金币+30, ★★★很有帮助 2015-12-11 21:10:51
普通的PCR问题不大,但是最好还是提高下纯度,不然后续实验失败原因都不好找。

你考虑下是不是裂解的时候样本量太大,导致裂解不充分所致?样品量并非多多益善。严格按照说明书步骤来提取,一般问题不大。
2楼2015-12-11 16:36:18
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

hcf321283

木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
zealoushebe: 金币+20, ★★★★★最佳答案 2015-12-11 21:32:50
偏低多少?PCR要求最好1.6-2.0之间,低于1.0后就重新纯化下吧,如果还在1.0以上,普通PCR基本没有问题,20ul体系25-75ng模板效果比较好。
3楼2015-12-11 16:44:05
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
普通回帖

zealoushebe

木虫 (初入文坛)

引用回帖:
3楼: Originally posted by hcf321283 at 2015-12-11 16:44:05
偏低多少?PCR要求最好1.6-2.0之间,低于1.0后就重新纯化下吧,如果还在1.0以上,普通PCR基本没有问题,20ul体系25-75ng模板效果比较好。

大概1.4左右,以前的都是2.0-2.1之间,有些DNA样品溶液有颜色,这会有影响么?
4楼2015-12-11 21:09:39
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

zealoushebe

木虫 (初入文坛)

引用回帖:
2楼: Originally posted by uulovelyuu at 2015-12-11 16:36:18
普通的PCR问题不大,但是最好还是提高下纯度,不然后续实验失败原因都不好找。

你考虑下是不是裂解的时候样本量太大,导致裂解不充分所致?样品量并非多多益善。严格按照说明书步骤来提取,一般问题不大。

具体应该怎么纯化呢?有说用氯仿萃取的,但是我DNA体积只有50μl,如果萃取估计不剩啥了
5楼2015-12-11 21:12:01
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

zealoushebe

木虫 (初入文坛)

引用回帖:
2楼: Originally posted by uulovelyuu at 2015-12-11 16:36:18
普通的PCR问题不大,但是最好还是提高下纯度,不然后续实验失败原因都不好找。

你考虑下是不是裂解的时候样本量太大,导致裂解不充分所致?样品量并非多多益善。严格按照说明书步骤来提取,一般问题不大。

如果不影响PCR出条带,产物直接测序会不会有影响呢?
6楼2015-12-11 21:12:56
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

hcf321283

木虫 (小有名气)

引用回帖:
4楼: Originally posted by zealoushebe at 2015-12-11 21:09:39
大概1.4左右,以前的都是2.0-2.1之间,有些DNA样品溶液有颜色,这会有影响么?...

没啥事!只要你PCR出了,测序的话只要测序公司技术员不傻,就能出

» 本帖已获得的红花(最新10朵)

7楼2015-12-11 21:20:24
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

zealoushebe

木虫 (初入文坛)

送红花一朵
引用回帖:
7楼: Originally posted by hcf321283 at 2015-12-11 21:20:24
没啥事!只要你PCR出了,测序的话只要测序公司技术员不傻,就能出...

这样就太好了,谢谢!

发自小木虫Android客户端
8楼2015-12-11 21:32:21
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

zealoushebe

木虫 (初入文坛)

引用回帖:
2楼: Originally posted by uulovelyuu at 2015-12-11 16:36:18
普通的PCR问题不大,但是最好还是提高下纯度,不然后续实验失败原因都不好找。

你考虑下是不是裂解的时候样本量太大,导致裂解不充分所致?样品量并非多多益善。严格按照说明书步骤来提取,一般问题不大。

昨天把样品pcr了co1序列,结果没有条带,会不会是蛋白质抑制了?有没有办法除掉DNA溶液里的蛋白?

发自小木虫Android客户端
9楼2015-12-13 22:41:48
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

hbsdz

新虫 (小有名气)

引用回帖:
9楼: Originally posted by zealoushebe at 2015-12-13 22:41:48
昨天把样品pcr了co1序列,结果没有条带,会不会是蛋白质抑制了?有没有办法除掉DNA溶液里的蛋白?
...

提取的DNA应该浓度不低,如果存在蛋白污染,那将DNA提取液稀释10倍或者100倍后再进行PCR就没有任何问题了。
我的邮箱:hbsdzml@163.com
10楼2015-12-14 21:41:25
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 zealoushebe 的主题更新
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 317求调剂 +11 蛋黄咸肉粽 2026-03-26 12/600 2026-03-31 13:30 by 记事本2026
[考研] 化学工程085602 305分求调剂 +27 RichLi_ 2026-03-25 31/1550 2026-03-31 13:22 by JourneyLucky
[考研] 085600材料与化工329分求调剂 +5 这是有太阳哇 2026-03-25 5/250 2026-03-31 09:59 by luoyongfeng
[考研] 293分求调剂,外语为俄语 +5 加一一九 2026-03-31 5/250 2026-03-31 09:39 by zhshch
[考研] 合肥区域性重点一本招收调剂 +4 6266jl 2026-03-30 4/200 2026-03-30 21:48 by zhuangyan123
[考研] 281求调剂 +5 亚克西good 2026-03-26 7/350 2026-03-30 20:42 by dophin1985
[考研] 324求调剂 +9 hanamiko 2026-03-26 11/550 2026-03-30 14:27 by JourneyLucky
[考研] 考研调剂 +5 Sanmu-124 2026-03-26 5/250 2026-03-30 13:36 by chemdavid
[考研] 318求调剂 +7 陈晨79 2026-03-30 7/350 2026-03-30 10:49 by 探123
[考研] 求调剂 +10 张zz111 2026-03-27 11/550 2026-03-30 09:17 by 无际的草原
[考研] 【求调剂】085601材料工程专硕 | 总分272 | +7 脚滑的守法公民 2026-03-27 7/350 2026-03-29 20:21 by dophin1985
[考研] 压国家一区线,求导师收留,有恩必谢! +7 迷人的哈哈 2026-03-28 7/350 2026-03-28 16:47 by 催化大白
[考研] 一志愿厦门大学化学学硕307求调剂 +10 y7czhao 2026-03-26 10/500 2026-03-28 14:23 by 唐沐儿
[考研] 复试调剂,一志愿南农083200食品科学与工程 +5 XQTJZ 2026-03-26 5/250 2026-03-27 14:49 by 狂炫麦当当
[考研] 348求调剂 +4 小懒虫不懒了 2026-03-27 5/250 2026-03-27 12:47 by 果果妈咪
[考研] 298调剂 +3 jiyingjie123 2026-03-27 3/150 2026-03-27 11:57 by wxiongid
[硕博家园] 北京林业大学硕导招生广告 +6 kongweilin 2026-03-26 8/400 2026-03-27 10:18 by FF_16
[考研] 中国科学院深圳先进技术研究院-光纤传感课题组招生-中国科学院大学、深圳理工大学联培 +5 YangTyu1 2026-03-26 5/250 2026-03-26 18:27 by 猫咪猫咪呀
[考研] 一志愿 南京邮电大学 288分 材料考研 求调剂 +3 jl0720 2026-03-26 3/150 2026-03-26 13:39 by zzll406
[考研] 求调剂 +3 李李不服输 2026-03-25 3/150 2026-03-25 13:03 by cmz0325
信息提示
请填处理意见