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北京石油化工学院2026年研究生招生接收调剂公告
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zealoushebe

木虫 (初入文坛)

[求助] 提取动物DNA样品,260/280偏低,怎么纯化? 已有2人参与

我在做DNA条形码研究,用天根试剂盒提取昆虫类动物DNA样品,超微量紫外测定结果2260/280普遍低于1.80。怀疑有蛋白质污染,这样的DNA能不能用于普通PCR扩增?我的DNA样品大概有50μL,有没有什么办法纯化一下呢?
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zealoushebe

木虫 (初入文坛)

引用回帖:
3楼: Originally posted by hcf321283 at 2015-12-11 16:44:05
偏低多少?PCR要求最好1.6-2.0之间,低于1.0后就重新纯化下吧,如果还在1.0以上,普通PCR基本没有问题,20ul体系25-75ng模板效果比较好。

大概1.4左右,以前的都是2.0-2.1之间,有些DNA样品溶液有颜色,这会有影响么?
4楼2015-12-11 21:09:39
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uulovelyuu

至尊木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

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感谢参与,应助指数 +1
zealoushebe: 金币+30, ★★★很有帮助 2015-12-11 21:10:51
普通的PCR问题不大,但是最好还是提高下纯度,不然后续实验失败原因都不好找。

你考虑下是不是裂解的时候样本量太大,导致裂解不充分所致?样品量并非多多益善。严格按照说明书步骤来提取,一般问题不大。
2楼2015-12-11 16:36:18
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hcf321283

木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

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感谢参与,应助指数 +1
zealoushebe: 金币+20, ★★★★★最佳答案 2015-12-11 21:32:50
偏低多少?PCR要求最好1.6-2.0之间,低于1.0后就重新纯化下吧,如果还在1.0以上,普通PCR基本没有问题,20ul体系25-75ng模板效果比较好。
3楼2015-12-11 16:44:05
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zealoushebe

木虫 (初入文坛)

引用回帖:
2楼: Originally posted by uulovelyuu at 2015-12-11 16:36:18
普通的PCR问题不大,但是最好还是提高下纯度,不然后续实验失败原因都不好找。

你考虑下是不是裂解的时候样本量太大,导致裂解不充分所致?样品量并非多多益善。严格按照说明书步骤来提取,一般问题不大。

具体应该怎么纯化呢?有说用氯仿萃取的,但是我DNA体积只有50μl,如果萃取估计不剩啥了
5楼2015-12-11 21:12:01
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