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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 核酸提取 » 提取动物DNA样品，260/280偏低，怎么纯化？
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zealoushebe

木虫 (初入文坛)

[求助] 提取动物DNA样品，260/280偏低，怎么纯化？ 已有2人参与

我在做DNA条形码研究，用天根试剂盒提取昆虫类动物DNA样品，超微量紫外测定结果2260/280普遍低于1.80。怀疑有蛋白质污染，这样的DNA能不能用于普通PCR扩增？我的DNA样品大概有50μL，有没有什么办法纯化一下呢？
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1楼 2015-12-11 15:09:45
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回帖支持 ( 显示支持度最高的前 50 名 )

uulovelyuu

至尊木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
zealoushebe: 金币+30, ★★★很有帮助 2015-12-11 21:10:51
普通的PCR问题不大，但是最好还是提高下纯度，不然后续实验失败原因都不好找。

你考虑下是不是裂解的时候样本量太大，导致裂解不充分所致？样品量并非多多益善。严格按照说明书步骤来提取，一般问题不大。
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2楼2015-12-11 16:36:18
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hcf321283

木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
zealoushebe: 金币+20, ★★★★★最佳答案 2015-12-11 21:32:50
偏低多少？PCR要求最好1.6-2.0之间，低于1.0后就重新纯化下吧，如果还在1.0以上，普通PCR基本没有问题，20ul体系25-75ng模板效果比较好。
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3楼2015-12-11 16:44:05
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普通回帖

zealoushebe

木虫 (初入文坛)
引用回帖:
3楼: Originally posted by hcf321283 at 2015-12-11 16:44:05
偏低多少？PCR要求最好1.6-2.0之间，低于1.0后就重新纯化下吧，如果还在1.0以上，普通PCR基本没有问题，20ul体系25-75ng模板效果比较好。

大概1.4左右，以前的都是2.0-2.1之间，有些DNA样品溶液有颜色，这会有影响么？
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4楼2015-12-11 21:09:39
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zealoushebe

木虫 (初入文坛)
引用回帖:
2楼: Originally posted by uulovelyuu at 2015-12-11 16:36:18
普通的PCR问题不大，但是最好还是提高下纯度，不然后续实验失败原因都不好找。

你考虑下是不是裂解的时候样本量太大，导致裂解不充分所致？样品量并非多多益善。严格按照说明书步骤来提取，一般问题不大。

具体应该怎么纯化呢？有说用氯仿萃取的，但是我DNA体积只有50μl，如果萃取估计不剩啥了
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5楼2015-12-11 21:12:01
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zealoushebe

木虫 (初入文坛)
引用回帖:
2楼: Originally posted by uulovelyuu at 2015-12-11 16:36:18
普通的PCR问题不大，但是最好还是提高下纯度，不然后续实验失败原因都不好找。

你考虑下是不是裂解的时候样本量太大，导致裂解不充分所致？样品量并非多多益善。严格按照说明书步骤来提取，一般问题不大。

如果不影响PCR出条带，产物直接测序会不会有影响呢？
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6楼2015-12-11 21:12:56
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hcf321283

木虫 (小有名气)
引用回帖:
4楼: Originally posted by zealoushebe at 2015-12-11 21:09:39
大概1.4左右，以前的都是2.0-2.1之间，有些DNA样品溶液有颜色，这会有影响么？...

没啥事！只要你PCR出了，测序的话只要测序公司技术员不傻，就能出
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zealoushebe
7楼2015-12-11 21:20:24
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zealoushebe

木虫 (初入文坛)
送红花一朵
引用回帖:
7楼: Originally posted by hcf321283 at 2015-12-11 21:20:24
没啥事！只要你PCR出了，测序的话只要测序公司技术员不傻，就能出...

这样就太好了，谢谢！

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8楼2015-12-11 21:32:21
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zealoushebe

木虫 (初入文坛)
引用回帖:
2楼: Originally posted by uulovelyuu at 2015-12-11 16:36:18
普通的PCR问题不大，但是最好还是提高下纯度，不然后续实验失败原因都不好找。

你考虑下是不是裂解的时候样本量太大，导致裂解不充分所致？样品量并非多多益善。严格按照说明书步骤来提取，一般问题不大。

昨天把样品pcr了co1序列，结果没有条带，会不会是蛋白质抑制了？有没有办法除掉DNA溶液里的蛋白？

发自小木虫Android客户端
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9楼2015-12-13 22:41:48
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hbsdz

新虫 (小有名气)
引用回帖:
9楼: Originally posted by zealoushebe at 2015-12-13 22:41:48
昨天把样品pcr了co1序列，结果没有条带，会不会是蛋白质抑制了？有没有办法除掉DNA溶液里的蛋白？
...

提取的DNA应该浓度不低，如果存在蛋白污染，那将DNA提取液稀释10倍或者100倍后再进行PCR就没有任何问题了。
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我的邮箱：hbsdzml@163.com
10楼2015-12-14 21:41:25
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