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提取动物DNA样品,260/280偏低,怎么纯化?
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zealoushebe
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提取动物DNA样品,260/280偏低,怎么纯化?
已有2人参与
我在做DNA条形码研究,用天根试剂盒提取昆虫类动物DNA样品,超微量紫外测定结果2260/280普遍低于1.80。怀疑有蛋白质污染,这样的DNA能不能用于普通PCR扩增?我的DNA样品大概有50μL,有没有什么办法纯化一下呢?
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2015-12-11 15:09:45
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zealoushebe
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2楼
:
Originally posted by
uulovelyuu
at 2015-12-11 16:36:18
普通的PCR问题不大,但是最好还是提高下纯度,不然后续实验失败原因都不好找。
你考虑下是不是裂解的时候样本量太大,导致裂解不充分所致?样品量并非多多益善。严格按照说明书步骤来提取,一般问题不大。
如果不影响PCR出条带,产物直接测序会不会有影响呢?
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6楼
2015-12-11 21:12:56
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uulovelyuu
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zealoushebe: 金币+30,
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很有帮助
2015-12-11 21:10:51
普通的PCR问题不大,但是最好还是提高下纯度,不然后续实验失败原因都不好找。
你考虑下是不是裂解的时候样本量太大,导致裂解不充分所致?样品量并非多多益善。严格按照说明书步骤来提取,一般问题不大。
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2楼
2015-12-11 16:36:18
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最佳答案
2015-12-11 21:32:50
偏低多少?PCR要求最好1.6-2.0之间,低于1.0后就重新纯化下吧,如果还在1.0以上,普通PCR基本没有问题,20ul体系25-75ng模板效果比较好。
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3楼
2015-12-11 16:44:05
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3楼
:
Originally posted by
hcf321283
at 2015-12-11 16:44:05
偏低多少?PCR要求最好1.6-2.0之间,低于1.0后就重新纯化下吧,如果还在1.0以上,普通PCR基本没有问题,20ul体系25-75ng模板效果比较好。
大概1.4左右,以前的都是2.0-2.1之间,有些DNA样品溶液有颜色,这会有影响么?
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4楼
2015-12-11 21:09:39
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