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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 核酸提取 » RNA提取有大量沉淀，求助
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Fujiya洋葱

新虫 (初入文坛)

[求助] RNA提取有大量沉淀，求助 已有1人参与

RNA提取，用的Trizol+组织块，自动研磨机打碎组织裂解，然后氯仿抽提，异丙醇沉淀。
在沉淀之后就出现了大量的沉淀，1.5ml的管子底下都是白的。
然后酒精清洗，最后DEPC水溶解。
发现大量沉淀都不能溶解，吹打后下层似絮状一般，上层为上清。
用NANOdrop测OD260/280及浓度，OD值基本上都在1.8以下。同一个样测多次每次浓度都不一样。
怀疑是蛋白质污染。
有没有同样遇到过这样问题的大神？你们怎么解决这个情况的？现在这一批样都不敢继续往下做，不知道哪步出了问题。
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1楼 2015-12-02 20:50:08
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生科深似海

新虫 (小有名气)
组织块弄一点儿就够了

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2楼2015-12-02 21:49:01
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爱情曼陀罗

新虫 (著名写手)
水溶解再提一次

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3楼2015-12-03 00:05:27
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Fujiya洋葱

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
2楼: Originally posted by 生科深似海 at 2015-12-02 21:49:01
组织块弄一点儿就够了

我也猜想是组织太多了。再加上是肝脏组织，大量脂肪的原因。另外想请教下，如果一次性提大量组织的话，是吧组织都拿出来一个个提还是放-80里面多开几次门防止组织冻融？
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4楼2015-12-03 18:03:19
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生科深似海

新虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
最好样品放-80度  可先用饭盒（手提的）盛点液氮  可一次性将多个样品从冰箱中取出 投入液氮中  一个一个提RNA 不担心降解了

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5楼2015-12-03 18:38:12
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