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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » PCR相关 » 荧光定量PCR问题求助
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dashi_123

银虫 (小有名气)

[求助] 荧光定量PCR问题求助 已有3人参与

如图，图形不是很好，求助何原因。
退火温度已经摸了，没问题。探针浓度也摸了，酶也摸了，求助各位大神。

荧光定量PCR问题求助


荧光定量PCR问题求助-1


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赐予我力量吧
1楼 2015-11-30 09:37:43
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dashi_123

银虫 (小有名气)
自己顶一个

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赐予我力量吧
2楼2015-11-30 10:28:27
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hanfusu

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
看扩增曲线上升坡度小，应该是扩增效率太低。考虑下可能的原因吧：模板不纯含有抑制物，引物设计不好等等，不局限这些。可以检验一下溶解曲线看有没有副产物形成，同时检验扩增效率正常95%～105%之间

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3楼2015-11-30 13:45:44
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a314919473

银虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
这个很正常，我们做的话也经常会是这样，原因还没分析过，3重复没问题，扩增效率没问题就行了。
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有你真好
4楼2015-11-30 16:30:19
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liping121200

铜虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
你的曲线达不到平台期，是引物没有设计好，探针不用换，需要根据探针的位置换一下引物，可以换一端的引物，拿来试试，我们是这么做的，曲线达不到平台期，再怎么优化体系都作用不大
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好好学习，天天向上
5楼2015-11-30 16:38:40
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dashi_123

银虫 (小有名气)
引用回帖:
5楼: Originally posted by liping121200 at 2015-11-30 16:38:40
你的曲线达不到平台期，是引物没有设计好，探针不用换，需要根据探针的位置换一下引物，可以换一端的引物，拿来试试，我们是这么做的，曲线达不到平台期，再怎么优化体系都作用不大

这是HEX通道的扩增，看来可能是引物问题，谢谢前辈
荧光定量PCR问题求助-2



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赐予我力量吧
6楼2015-12-01 07:40:33
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dashi_123

银虫 (小有名气)
引用回帖:
3楼: Originally posted by hanfusu at 2015-11-30 13:45:44
看扩增曲线上升坡度小，应该是扩增效率太低。考虑下可能的原因吧：模板不纯含有抑制物，引物设计不好等等，不局限这些。可以检验一下溶解曲线看有没有副产物形成，同时检验扩增效率正常95%～105%之间
...

谢谢前辈指导

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赐予我力量吧
7楼2015-12-01 07:41:09
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dashi_123

银虫 (小有名气)
小弟先行改一下一通道引物试试。
荧光定量PCR问题求助-3



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赐予我力量吧
8楼2015-12-01 07:43:06
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