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pcr实际扩出的序列比理论的长。 已有7人参与
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鉴定寄生虫的种类，从形态学上我只能确定其是膜壳科的，然后我就在ncbi上搜膜壳科的28s的nucleotide，找到一个膜壳科的700多bp的参考序列，然后设计一对引物，引物扩增的理论长度是429bp，可是我今天跑完胶看到条带应该有600多bp，我的上游引物是： AGTATGCCGCTCGTCTGTTG 下游： GAAACCACCGTCGGACCTA C 请大神解答为什么p的实际长度比理论长度大呢？下附我的引物图。 备选28s新送.PNG |
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2楼2015-11-24 22:51:16
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3楼2015-11-25 11:08:29
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4楼2015-11-25 11:12:24
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引物特异性不行吧，扩增条带不对跟引物关系很大的，还有如果你是测序基因，那野生型和突变体条带不一样大你就该笑了，可能是插入缺失大片段 发自小木虫Android客户端 |
5楼2015-11-25 11:24:49
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如上所说，特异不行是一方面。但是也有可能是有亲源性，但不同的其它序列，所以有人建议你去测序，这个最直观，可以鉴别是以上哪种情况。也可以blast引物，给多一种可能性，但是不能推断是哪种情况。 发自小木虫Android客户端 |
6楼2015-11-25 12:19:23
7楼2015-11-25 12:48:53
8楼2015-11-25 15:45:06
9楼2015-12-01 22:21:18
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我第一次胶回收测序没找到下游引物，然后我就插入到18t转化连接测序，找到了上下引物，然后blast，结果如图，前面红色的都是和我这个物种亲缘关系近的，而后面的粉色那三个是一种植物的片段，这是为什么啊？  发自小木虫Android客户端 |
10楼2015-12-01 22:32:38