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林之子云

新虫 (初入文坛)

[交流] pcr实际扩出的序列比理论的长。 已有7人参与

鉴定寄生虫的种类,从形态学上我只能确定其是膜壳科的,然后我就在ncbi上搜膜壳科的28s的nucleotide,找到一个膜壳科的700多bp的参考序列,然后设计一对引物,引物扩增的理论长度是429bp,可是我今天跑完胶看到条带应该有600多bp,我的上游引物是:  AGTATGCCGCTCGTCTGTTG  下游: GAAACCACCGTCGGACCTA C  请大神解答为什么p的实际长度比理论长度大呢?下附我的引物图。

pcr实际扩出的序列比理论的长。
备选28s新送.PNG
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张俊亚

木虫 (正式写手)


小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
拿你的引物去NCBI进行blast看看有没有600左右的就知道了

发自小木虫Android客户端
4楼2015-11-25 11:12:24
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soarrow

铁杆木虫 (正式写手)

酱油歪楼党


小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
胶回收,然后送去测序看看,,,说不准有发现
2楼2015-11-24 22:51:16
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loveming313

新虫 (小有名气)


小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
可能上下游引物特异性不够,看看你的模板DNA序列,重新设计下引物
Find the sunshine in your heart,let it go,you can get past the rainyday
3楼2015-11-25 11:08:29
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beiice

新虫 (小有名气)


小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
引物特异性不行吧,扩增条带不对跟引物关系很大的,还有如果你是测序基因,那野生型和突变体条带不一样大你就该笑了,可能是插入缺失大片段

发自小木虫Android客户端
5楼2015-11-25 11:24:49
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