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有人做过排质粒吗 求助 已有2人参与
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我想将克雷伯菌中的质粒排出，请问有人做过吗？是用氯化钙做吗？求教 发自小木虫IOS客户端 |
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2楼2015-09-21 23:36:47
huangrui1988 
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【答案】应助回帖
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yubaihui01: 金币+5, ★有帮助 2015-09-22 13:41:26
| 你构建一个筛选压力，比如你这个质粒除了抗性基因之外，还有没有别的基因，以及有没有诱导性的启动子？假如有的话，你可以加大诱导剂的用量。假如只有抗性基因的话，你就在没有抗性基因的液体培养基中培养 10代， 简单说，就是培养一天，取一部分出来，再养一天，依次重复。然后涂布在没有抗性的平板上，看看最后那些菌株只能够在没有抗性的平板上生长，就是你要的啦。 |
3楼2015-09-22 04:13:03
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我用的是pET28a的质粒，本身带有kan抗性，我之前在这个质粒上构建了上下同源臂和氯霉素抗性，现在发现已经和克雷伯成功重组。我要排质粒的话，您的意思是只要把这个菌在不加任何抗性的培养基里传代10代就行吗？我想问不加CaCl2也可以吗？在传代的时候它会不会重组回去…… 发自小木虫IOS客户端 |
4楼2015-09-22 07:45:38
zhaodahe
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5楼2015-09-22 07:58:46
huangrui1988
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6楼2015-09-22 11:48:33
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huangrui1988
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8楼2015-09-22 21:13:18
yangtzelv
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9楼2015-09-22 21:45:10
10楼2015-10-05 15:09:33