应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 有人做过排质粒吗 求助
101/1返回列表
查看: 985  |  回复: 9
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看

yubaihui01

新虫 (初入文坛)

[求助] 有人做过排质粒吗 求助 已有2人参与

我想将克雷伯菌中的质粒排出，请问有人做过吗？是用氯化钙做吗？求教

发自小木虫IOS客户端
回复此楼

» 猜你喜欢
1楼 2015-09-21 23:17:24
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

yubaihui01

新虫 (初入文坛)
急求帮忙！T.T

发自小木虫IOS客户端
回复此楼
2楼2015-09-21 23:36:47
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

huangrui1988

铜虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
myprayer: 金币+1, 赠人玫瑰，手有余香，分子生物期待您更多精彩。 2015-09-22 12:09:31
yubaihui01: 金币+5, ★有帮助 2015-09-22 13:41:26
你构建一个筛选压力，比如你这个质粒除了抗性基因之外，还有没有别的基因，以及有没有诱导性的启动子？假如有的话，你可以加大诱导剂的用量。假如只有抗性基因的话，你就在没有抗性基因的液体培养基中培养 10代， 简单说，就是培养一天，取一部分出来，再养一天，依次重复。然后涂布在没有抗性的平板上，看看最后那些菌株只能够在没有抗性的平板上生长，就是你要的啦。
赞一下(2人) 回复此楼
3楼2015-09-22 04:13:03
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

yubaihui01

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
3楼: Originally posted by huangrui1988 at 2015-09-22 04:13:03
你构建一个筛选压力，比如你这个质粒除了抗性基因之外，还有没有别的基因，以及有没有诱导性的启动子？假如有的话，你可以加大诱导剂的用量。假如只有抗性基因的话，你就在没有抗性基因的液体培养基中培养 10代， 简 ...

我用的是pET28a的质粒，本身带有kan抗性，我之前在这个质粒上构建了上下同源臂和氯霉素抗性，现在发现已经和克雷伯成功重组。我要排质粒的话，您的意思是只要把这个菌在不加任何抗性的培养基里传代10代就行吗？我想问不加CaCl2也可以吗？在传代的时候它会不会重组回去……

发自小木虫IOS客户端
赞一下 回复此楼
4楼2015-09-22 07:45:38
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

zhaodahe

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
myprayer: 金币+1, 赠人玫瑰，手有余香，分子生物期待您更多精彩。 2015-09-22 12:09:42
如果容易丢失直接传代就可以，如果不易丢，可以试试在贫瘠的培养条件下传代。野生菌都用这种方法吧。

[ 发自手机版 http://muchong.com/3g ]
赞一下 回复此楼
5楼2015-09-22 07:58:46
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

huangrui1988

铜虫 (小有名气)
商家已经主动声明此回帖可能含有宣传内容
引用回帖:
4楼: Originally posted by yubaihui01 at 2015-09-22 07:45:38
我用的是pET28a的质粒，本身带有kan抗性，我之前在这个质粒上构建了上下同源臂和氯霉素抗性，现在发现已经和克雷伯成功重组。我要排质粒的话，您的意思是只要把这个菌在不加任何抗性的培养基里传代10代就行吗？我想 ...

完全不明白为什么要加氯化钙。。。。以及按照道理来说pET28a应该不能够在你的菌里面复制才对啊。
赞一下 回复此楼
6楼2015-09-22 11:48:33
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

yubaihui01

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
6楼: Originally posted by huangrui1988 at 2015-09-22 11:48:33
完全不明白为什么要加氯化钙。。。。以及按照道理来说pET28a应该不能够在你的菌里面复制才对啊。...

氯化钙是不是能增加细胞壁通透性

发自小木虫IOS客户端
赞一下 回复此楼
7楼2015-09-22 12:03:16
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

huangrui1988

铜虫 (小有名气)
引用回帖:
7楼: Originally posted by yubaihui01 at 2015-09-22 12:03:16
氯化钙是不是能增加细胞壁通透性
...

那个是做感受态用的。。。不有助于排出质粒。不要搞混了。
赞一下 回复此楼
8楼2015-09-22 21:13:18
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

yangtzelv

新虫 (小有名气)
适当浓度SDS，连续传代后平板筛选。
赞一下 回复此楼
9楼2015-09-22 21:45:10
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

yubaihui01

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
9楼: Originally posted by yangtzelv at 2015-09-22 21:45:10
适当浓度SDS，连续传代后平板筛选。

请问SDS浓度多少为宜？

发自小木虫IOS客户端
赞一下 回复此楼
10楼2015-10-05 15:09:33
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 yubaihui01 的主题更新
101/1返回列表
普通表情 龙 兔 虎 猫
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭