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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 核酸提取 » 壳斗科锥属植物DNA提取，一开始提出来的有降解，之后不管用什么方法都提不出来
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漠筱禾

金虫 (初入文坛)

[求助] 壳斗科锥属植物DNA提取，一开始提出来的有降解，之后不管用什么方法都提不出来 已有3人参与

如题，用硅胶保存的叶片，之前用QIAGEN的试剂盒提出来过，现在用同样的试剂盒就提不出来了，糖的含量很高，过白色的柱子都离不下去，用CTAB-free冰浴十分钟抽提1-2次后，可以去掉大部分的糖，之后再按照QIAGEN的步骤提，很容易过柱子，但是跑胶什么都没有，测浓度显示10-20ng/ul，纯度也还好。用CTAB也试过，步骤如下：1mlCTAB-free（用的时候加了10ul巯基乙醇）冰浴十分钟，9000rad/min离心5min，去上清，加入1mlCTAB（用的时候加了10ul巯基乙醇），65度水浴45min，离心，酚氯仿异戊醇（25：24：1）抽提，离心取上清，氯仿异戊醇（24:1）抽提，取上清，加入1/10体积的NaAc，混匀，加入两倍体积的预冷无水乙醇，混匀，-20度存放两小时以上，1200rad/min 10min离心，75%乙醇清洗两次，干了之后加入100ulQIAGEN试剂盒的bufferAE和1ulRNA酶，65度水浴溶解后跑胶。如果不用CTAB-free抽提，沉淀DNA的时候会析出大量白色胶状沉淀，很像DNA，但是挑出清洗溶解后跑胶也是空白。材料用磨样仪磨和液氮磨都试过。
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1楼 2015-09-18 17:00:09
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Neo2000

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
myprayer: 金币+1, 赠人玫瑰，手有余香，分子生物期待您更多精彩。 2015-10-10 16:54:46
试下成都福际的试剂盒，他们家的试剂盒不比进口的差

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2楼2015-09-18 18:42:03
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173734022

禁虫 (著名写手)
本帖内容被屏蔽
3楼2015-09-29 16:41:31
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漠筱禾

金虫 (初入文坛)
引用回帖:
3楼: Originally posted by 173734022 at 2015-09-29 16:41:31
我和你一样的 用乙醇沉淀时整个成乳白色!跑胶并没有什么！顺便问下楼主CTABfree是什么？

就是配CTAB缓冲液时不加CTAB，其他的都加
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4楼2015-10-05 11:26:52
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jackyoung

新虫 (正式写手)
9000 rad/min这rad/min是几个意思？

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CestLaVie
5楼2015-10-05 12:18:56
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蜈蚣出门

铜虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★
myprayer: 金币+1, 赠人玫瑰，手有余香，分子生物期待您更多精彩。 2015-10-10 16:55:12
后面的1200rad/min是打错了吧？12000？我建议你去cnki下载王军的木本植物DNA提取，另外，你跑胶的loading buffer有问题没？

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6楼2015-10-05 15:36:03
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173734022

禁虫 (著名写手)
本帖内容被屏蔽
7楼2015-10-08 12:57:07
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173734022

禁虫 (著名写手)
本帖内容被屏蔽
8楼2015-10-08 13:11:16
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漠筱禾

金虫 (初入文坛)
引用回帖:
6楼: Originally posted by 蜈蚣出门 at 2015-10-05 15:36:03
后面的1200rad/min是打错了吧？12000？我建议你去cnki下载王军的木本植物DNA提取，另外，你跑胶的loading buffer有问题没？

额，是我打错了，是12000
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9楼2015-10-10 09:20:33
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漠筱禾

金虫 (初入文坛)
引用回帖:
6楼: Originally posted by 蜈蚣出门 at 2015-10-05 15:36:03
后面的1200rad/min是打错了吧？12000？我建议你去cnki下载王军的木本植物DNA提取，另外，你跑胶的loading buffer有问题没？

loadingbuffer用的是takara的，没有问题，缓冲液也没有问题，同组的同学和我一样用相同的缓冲液跑RNA都没有问题，PCR产物跑胶也没有问题
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10楼2015-10-10 09:22:29
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