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漠筱禾

金虫 (初入文坛)

[求助] 壳斗科锥属植物DNA提取,一开始提出来的有降解,之后不管用什么方法都提不出来 已有3人参与

如题,用硅胶保存的叶片,之前用QIAGEN的试剂盒提出来过,现在用同样的试剂盒就提不出来了,糖的含量很高,过白色的柱子都离不下去,用CTAB-free冰浴十分钟抽提1-2次后,可以去掉大部分的糖,之后再按照QIAGEN的步骤提,很容易过柱子,但是跑胶什么都没有,测浓度显示10-20ng/ul,纯度也还好。用CTAB也试过,步骤如下:1mlCTAB-free(用的时候加了10ul巯基乙醇)冰浴十分钟,9000rad/min离心5min,去上清,加入1mlCTAB(用的时候加了10ul巯基乙醇),65度水浴45min,离心,酚氯仿异戊醇(25:24:1)抽提,离心取上清,氯仿异戊醇(24:1)抽提,取上清,加入1/10体积的NaAc,混匀,加入两倍体积的预冷无水乙醇,混匀,-20度存放两小时以上,1200rad/min 10min离心,75%乙醇清洗两次,干了之后加入100ulQIAGEN试剂盒的bufferAE和1ulRNA酶,65度水浴溶解后跑胶。如果不用CTAB-free抽提,沉淀DNA的时候会析出大量白色胶状沉淀,很像DNA,但是挑出清洗溶解后跑胶也是空白。材料用磨样仪磨和液氮磨都试过。
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漠筱禾

金虫 (初入文坛)

引用回帖:
6楼: Originally posted by 蜈蚣出门 at 2015-10-05 15:36:03
后面的1200rad/min是打错了吧?12000?我建议你去cnki下载王军的木本植物DNA提取,另外,你跑胶的loading buffer有问题没?

loadingbuffer用的是takara的,没有问题,缓冲液也没有问题,同组的同学和我一样用相同的缓冲液跑RNA都没有问题,PCR产物跑胶也没有问题
10楼2015-10-10 09:22:29
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Neo2000

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖


感谢参与,应助指数 +1
myprayer: 金币+1, 赠人玫瑰,手有余香,分子生物期待您更多精彩。 2015-10-10 16:54:46
试下成都福际的试剂盒,他们家的试剂盒不比进口的差

发自小木虫Android客户端
2楼2015-09-18 18:42:03
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173734022

禁虫 (著名写手)

本帖内容被屏蔽

3楼2015-09-29 16:41:31
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漠筱禾

金虫 (初入文坛)

引用回帖:
3楼: Originally posted by 173734022 at 2015-09-29 16:41:31
我和你一样的 用乙醇沉淀时整个成乳白色!跑胶并没有什么!顺便问下楼主CTABfree是什么?

就是配CTAB缓冲液时不加CTAB,其他的都加
4楼2015-10-05 11:26:52
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