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饿的神啊

新虫 (著名写手)

[求助] 引物扩增效率太低，如何提高 已有5人参与

引物扩增效率低，只有64.4%，但是相关性较高，达到0.997，怎么提高引物的扩增效率呢

引物扩增效率太低，如何提高
溶解曲线.png


引物扩增效率太低，如何提高-1
扩增.png


引物扩增效率太低，如何提高-2
扩增效率.jpg
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1楼 2015-09-11 15:50:55
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
回帖支持 ( 显示支持度最高的前 50 名 )

biostar2009

专家顾问 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
饿的神啊: 金币+5, ★★★很有帮助 2015-09-13 16:14:54
引用回帖:
14楼: Originally posted by 饿的神啊 at 2015-09-12 19:26:04
引物是不是都是在保守区设计的？我试过别的引物，软件评价不好，得分很低，有发夹，错配什么的，好纠结
...

设计引物的标准可以写满一本书，但是检测只有一条，试一试才知道。这是一件后验的事情，而且各种标准的概率还不高，有点尽人事，听天命的感觉。不过你还是得把人事尽了。。。
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16楼2015-09-13 13:52:13
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kobe199613

木虫之王 (知名作家)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
尝试提高dNTP浓度
在不影响扩增的条件下，适当降低退火温度，一般能解决。
当然稍微加大酶量也是起作用的。
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【招聘】医用高分子材料研发工程师（北京）
5楼2015-09-11 21:28:20
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王冠傑

铁虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
饿的神啊: 金币+5, ★★★很有帮助 2015-09-13 16:10:56
首先排除引物质量问题，建议您做一个纯度测试，找合成公司都可以免费做。如果引物本身质量没有问题的话你换个位置重新设计引物吧，5端at所占比例要高一些，3末端最好是g或者c。

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7楼2015-09-12 06:47:23
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许彦

木虫 (正式写手)
引用回帖:
3楼: Originally posted by biostar2009 at 2015-09-11 19:56:56
跟多少倍稀释有关系么？...

我不太确定，我们一般都是十倍稀释的。

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9楼2015-09-12 14:22:14
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普通回帖

许彦

木虫 (正式写手)
你确定是十倍稀释吗？

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2楼2015-09-11 17:30:06
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biostar2009

专家顾问 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
引用回帖:
2楼: Originally posted by 许彦 at 2015-09-11 17:30:06
你确定是十倍稀释吗？

跟多少倍稀释有关系么？
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3楼2015-09-11 19:56:56
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biostar2009

专家顾问 (正式写手)

【答案】应助回帖

★
myprayer: 金币+1, 赠人玫瑰，手有余香，分子生物期待您更多精彩。 2015-09-11 20:14:31
R2很好，说明测得很准，
但是引物的扩增效率几乎是引物的固有属性，说明你只有换个地方再设计试试了。
尤其是偏低的，一般也跟抑制剂没啥关系。
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4楼2015-09-11 19:58:58
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baichi121234

禁虫 (职业作家)
本帖内容被屏蔽
6楼2015-09-11 23:24:47
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棍子168

至尊木虫 (著名写手)
怎么看扩增效率啊

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天道酬勤
8楼2015-09-12 08:01:00
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vincent_hpax

铁杆木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
是比较低 建议换引物，合成的时候选择高纯度合成

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博学 慎思 明辨 笃行
10楼2015-09-12 14:59:52
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