24小时热门版块排行榜    

查看: 7644  |  回复: 19

农学苦逼博士

新虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
看到楼主的帖子,忽然想到现在的科研是不是不做分子就没法进行下去了?看各个期刊都是基因、表达啥的!真的无语了!
11楼2015-09-12 16:44:16
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

饿的神啊

新虫 (著名写手)

引用回帖:
2楼: Originally posted by 许彦 at 2015-09-11 17:30:06
你确定是十倍稀释吗?

是的,模板是质粒,10微升加到90微升水中,一共坐了8个梯度

[ 发自小木虫客户端 ]
12楼2015-09-12 19:23:05
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

饿的神啊

新虫 (著名写手)

引用回帖:
5楼: Originally posted by kobe199613 at 2015-09-11 21:28:20
尝试提高dNTP浓度
在不影响扩增的条件下,适当降低退火温度,一般能解决。
当然稍微加大酶量也是起作用的。

但是用的syber green,不是各种剂量都是固定的吗,怎么调整啊

[ 发自小木虫客户端 ]
13楼2015-09-12 19:24:08
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

饿的神啊

新虫 (著名写手)

引用回帖:
4楼: Originally posted by biostar2009 at 2015-09-11 19:58:58
R2很好,说明测得很准,
但是引物的扩增效率几乎是引物的固有属性,说明你只有换个地方再设计试试了。
尤其是偏低的,一般也跟抑制剂没啥关系。

引物是不是都是在保守区设计的?我试过别的引物,软件评价不好,得分很低,有发夹,错配什么的,好纠结

[ 发自小木虫客户端 ]
14楼2015-09-12 19:26:04
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

biostar2009

专家顾问 (正式写手)

【答案】应助回帖

引用回帖:
9楼: Originally posted by 许彦 at 2015-09-12 14:22:14
我不太确定,我们一般都是十倍稀释的。
...



事实上没关系,本质上是对数换指数运算,其实跟底数关系不大,有兴趣你可以推推公式,一般而言用10,你要是来5个10倍梯度拉得太大,稀的Ct都不知道去哪了。。。显然也可以用5倍或者3倍
15楼2015-09-13 13:50:01
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

biostar2009

专家顾问 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
饿的神啊: 金币+5, ★★★很有帮助 2015-09-13 16:14:54
引用回帖:
14楼: Originally posted by 饿的神啊 at 2015-09-12 19:26:04
引物是不是都是在保守区设计的?我试过别的引物,软件评价不好,得分很低,有发夹,错配什么的,好纠结
...

设计引物的标准可以写满一本书,但是检测只有一条,试一试才知道。这是一件后验的事情,而且各种标准的概率还不高,有点尽人事,听天命的感觉。不过你还是得把人事尽了。。。
16楼2015-09-13 13:52:13
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

饿的神啊

新虫 (著名写手)

引用回帖:
8楼: Originally posted by 棍子168 at 2015-09-12 08:01:00
怎么看扩增效率啊

E就是扩增效率,有个公式,跟标曲的斜率有关

[ 发自小木虫客户端 ]
17楼2015-09-13 16:13:50
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

许彦

木虫 (正式写手)

引用回帖:
15楼: Originally posted by biostar2009 at 2015-09-13 13:50:01


事实上没关系,本质上是对数换指数运算,其实跟底数关系不大,有兴趣你可以推推公式,一般而言用10,你要是来5个10倍梯度拉得太大,稀的Ct都不知道去哪了。。。显然也可以用5倍或者3倍...

理论上是这样,我做过二倍,五倍,十倍稀释,最后只有10倍的e在0.99  不知道是不是我的稀释不好,所以建议一般用十倍。

发自小木虫Android客户端
18楼2015-09-14 06:16:04
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

linzshit

银虫 (小有名气)

加点Mg2+吧,应该有用
19楼2015-09-14 10:47:01
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

董红红

铜虫 (小有名气)

引用回帖:
4楼: Originally posted by biostar2009 at 2015-09-11 19:58:58
R2很好,说明测得很准,
但是引物的扩增效率几乎是引物的固有属性,说明你只有换个地方再设计试试了。
尤其是偏低的,一般也跟抑制剂没啥关系。

你好。我想请教一下,我做定量碰到的问题是扩增效率一直高于120,该怎么优化呢?谢谢

发自小木虫IOS客户端
20楼2015-11-20 01:08:33
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 饿的神啊 的主题更新
信息提示
请填处理意见