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loveming313

新虫 (小有名气)

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[交流] 请大家帮帮忙，这个PCR程序是什么意思？如何在PCR仪上设置？

请大家帮帮忙，这个PCR程序是什么意思？如何在PCR仪上设置？
1.这是属于跳跃PCR ,还是什么?
2.这种PCR用普通taq酶可以P吗？
3.在PCR仪上如何设置这个程序？
4.PCR程序中变性、退火、延伸的反应时间是怎么确定的？和哪些因素（如酶、扩增片段、模板）有关？

搜狗截图15年09月09日PCR程序.png

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1楼 2015-09-09 17:07:27

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loveming313

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引用回帖:

11楼: Originally posted by 枭翔 at 2015-09-10 13:34:14
如果你的目的是目的基因表达的话，需要换一个高保真的酶，Taq不行。

1 95°       5min
2 95°       30s
3 65°       30s
4 72°       1min
第二步到第四步10个循环，每循环降低 ...

你好，谢谢你的建议，我稍微修改了下：每循环降低0.5℃（即退火温度从65—60），现在能跑出666bp的野生型条带【如图，Marker为DL100】；但850bp的条带P不出来，很让人着急。
666bp目的片段的前引物是TCA GTT TCC TTG GCT ACC AGA，后引物TTC CAT TAC AGT CAC TCC AGA TGT（后引物是共用的）
850bp目的片段的前引物是TGC CTG CTC TTT ACT GAA GG，后引物是TTC CAT TAC AGT CAC TCC AGA TGT，这个扩增条件怎么设呢？