24小时热门版块排行榜    

查看: 6954  |  回复: 23
当前只显示满足指定条件的回帖,点击这里查看本话题的所有回帖

loveming313

新虫 (小有名气)


[交流] 请大家帮帮忙,这个PCR程序是什么意思?如何在PCR仪上设置?

请大家帮帮忙,这个PCR程序是什么意思?如何在PCR仪上设置?
1.这是属于跳跃PCR ,还是什么?
2.这种PCR用普通taq酶可以P吗?
3.在PCR仪上如何设置这个程序?
4.PCR程序中变性、退火、延伸的反应时间是怎么确定的?和哪些因素(如酶、扩增片段、模板)有关?

请大家帮帮忙,这个PCR程序是什么意思?如何在PCR仪上设置?
搜狗截图15年09月09日PCR程序.png
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐,对您同样有帮助:

» 抢金币啦!回帖就可以得到:

查看全部散金贴

已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

loveming313

新虫 (小有名气)


送红花一朵
引用回帖:
11楼: Originally posted by 枭翔 at 2015-09-10 13:34:14
如果你的目的是目的基因表达的话,需要换一个高保真的酶,Taq不行。

1    95°          5min
2    95°          30s
3    65°          30s
4    72°          1min
第二步到第四步10个循环,每循环降低 ...

你好,谢谢你的建议,我稍微修改了下:每循环降低0.5℃(即退火温度从65—60),现在能跑出666bp的野生型条带【如图,Marker为DL100】;但850bp的条带P不出来,很让人着急。
666bp目的片段的前引物是TCA GTT TCC TTG GCT ACC AGA,后引物TTC CAT TAC AGT CAC TCC AGA TGT(后引物是共用的)
850bp目的片段的前引物是TGC CTG CTC TTT ACT GAA GG,后引物是TTC CAT TAC AGT CAC TCC AGA TGT,这个扩增条件怎么设呢?
请大家帮帮忙,这个PCR程序是什么意思?如何在PCR仪上设置?-1
搜狗截图15年09月19日1420_2.png

12楼2015-09-19 14:20:53
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 24 个回答

顾在

新虫 (初入文坛)



小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
你这是做什么实验用的呢,循环数也没有,退火温度是与引物相关,而延伸时间与扩增片段大小相关,大概只知道是两步pcr
2楼2015-09-09 17:42:10
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

枭翔

金虫 (正式写手)



小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
降落PCR,第5步应该10个循环,第9步应该25个循环。
3楼2015-09-09 18:51:40
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

loveming313

新虫 (小有名气)


引用回帖:
2楼: Originally posted by 顾在 at 2015-09-09 17:42:10
你这是做什么实验用的呢,循环数也没有,退火温度是与引物相关,而延伸时间与扩增片段大小相关,大概只知道是两步pcr

是突变型小鼠鉴定用的,扩增片段为850bp 和666bp,循环数第一个是10,第二个是28.
我不知道第4部后面0.5C per cycle 是什么意思?
4楼2015-09-10 08:01:25
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
简单回复
2015-09-19 17:47   回复  
小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
发自小木虫Android客户端
普通表情 高级回复 (可上传附件)
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[文学芳草园] 梦想 +5 myrtle 2026-08-26 5/250 2026-08-31 14:40 by hahaboy
[基金申请] 中青基了要发朋友圈吗? +7 349506619 2026-08-28 7/350 2026-08-31 13:39 by 冼亮淀粉酶
[基金申请] 基金不中,共勉 +12 eulota 2026-08-26 12/600 2026-08-31 08:42 by ZJTJZ
[基金申请] 面上意见出来了 +10 黄鸟于飞Chao 2026-08-29 19/950 2026-08-31 08:01 by blueearth171
[考博] 找导师 +6 yuanjiabao 2026-08-29 7/350 2026-08-30 14:40 by 生科新手
[基金申请] 麻烦专家们看看评委们的意见(F口面上) +6 gdd2018 2026-08-28 11/550 2026-08-30 08:58 by 超级无敌华子
[基金申请] 我就是申请一个面上项目而已,这评审意见是按照杰青的条件评的吧? +6 gouxfjh 2026-08-28 11/550 2026-08-30 07:57 by gouxfjh
[基金申请] 国自然面上复盘~欢迎讨论 (金币+15) +15 晴天加油 2026-08-26 16/800 2026-08-29 18:28 by symmetry
[基金申请] 国自然评审意见 +13 wangmingqi 2026-08-28 19/950 2026-08-29 10:22 by Poppy1104
[基金申请] 哪位高人中了,把查询到的截图贴出来让我看看,让我长长见识 +5 yuleib84 2026-08-26 6/300 2026-08-28 00:02 by yudaoqian88
[基金申请] 面上合作单位盖章 +5 ssyjh 2026-08-27 5/250 2026-08-27 20:50 by gdfollow
[基金申请] 看板上这么多中的,有点像50人群里49个人都是骗子的那种感觉…… +5 a089 2026-08-26 6/300 2026-08-27 14:05 by jonewore
[基金申请] 怎么看青基中了没有啊 +5 叶九微 2026-08-26 5/250 2026-08-27 10:35 by l_zh2008
[基金申请] 我不理解! +15 Edward_pc 2026-08-26 23/1150 2026-08-26 20:34 by zzuzxg
[基金申请] 2026年8月25日国自然放榜前突然收到列入评审专家邮件,有关系吗? +25 木水思豆 2026-08-25 28/1400 2026-08-26 14:53 by draco1987
[基金申请] 出来了 +9 trojank 2026-08-26 9/450 2026-08-26 14:25 by 宝贝虫子
[基金申请] 国合里面能看到了 +7 一怀馨秋 2026-08-26 7/350 2026-08-26 11:23 by zhaosm1982
[基金申请] 国合可查了 +3 paperzjh 2026-08-26 3/150 2026-08-26 10:41 by LemmonTr
[基金申请] 国合现在查不到了吗? +10 chengyan1220 2026-08-24 20/1000 2026-08-26 08:57 by peasantsprig
[基金申请] 某些机构,以效率低为荣,以效率低作为存在感 +9 yuleib84 2026-08-25 10/500 2026-08-25 17:14 by alexon
信息提示
请填处理意见