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loveming313

新虫 (小有名气)

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[交流] 请大家帮帮忙，这个PCR程序是什么意思？如何在PCR仪上设置？

请大家帮帮忙，这个PCR程序是什么意思？如何在PCR仪上设置？
1.这是属于跳跃PCR ,还是什么?
2.这种PCR用普通taq酶可以P吗？
3.在PCR仪上如何设置这个程序？
4.PCR程序中变性、退火、延伸的反应时间是怎么确定的？和哪些因素（如酶、扩增片段、模板）有关？

搜狗截图15年09月09日PCR程序.png

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1楼 2015-09-09 17:07:27

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枭翔

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引用回帖:

9楼: Originally posted by loveming313 at 2015-09-10 11:28:45
1.我用的酶是Thermo家的Taq DNA Polymerase
2.那这个变性、退火、延伸的反应时间怎么确定的？扩增的片段大小分别是666bp和850bp
3.能不能帮忙设计一下PCR反应条件，拜托了
这个图就是PCR鉴定程序

021302.png
...

如果你的目的是目的基因表达的话，需要换一个高保真的酶，Taq不行。

1 95°       5min
2 95°       30s
3 65°       30s
4 72°       1min
第二步到第四步10个循环，每循环降低1°
5 95°       30s
6 55°       30s
7 72°       1min
第五步到第七步25个循环
8 72°       10min
9 10°       ∞

这个程序是以前用过的Taq酶的touchdown，你可以参考一下