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loveming313

新虫 (小有名气)

[交流] 请大家帮帮忙，这个PCR程序是什么意思？如何在PCR仪上设置？

请大家帮帮忙，这个PCR程序是什么意思？如何在PCR仪上设置？
1.这是属于跳跃PCR ,还是什么?
2.这种PCR用普通taq酶可以P吗？
3.在PCR仪上如何设置这个程序？
4.PCR程序中变性、退火、延伸的反应时间是怎么确定的？和哪些因素（如酶、扩增片段、模板）有关？

请大家帮帮忙，这个PCR程序是什么意思？如何在PCR仪上设置？
搜狗截图15年09月09日PCR程序.png
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1楼 2015-09-09 17:07:27
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枭翔

金虫 (正式写手)
★
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引用回帖:
9楼: Originally posted by loveming313 at 2015-09-10 11:28:45
1.我用的酶是Thermo家的Taq DNA Polymerase
2.那这个变性、退火、延伸的反应时间怎么确定的？扩增的片段大小分别是666bp和850bp
3.能不能帮忙设计一下PCR反应条件，拜托了
这个图就是PCR鉴定程序

021302.png
...

如果你的目的是目的基因表达的话，需要换一个高保真的酶，Taq不行。

1    95°          5min
2    95°          30s
3    65°          30s
4    72°          1min
第二步到第四步10个循环，每循环降低1°
5    95°          30s
6    55°          30s
7    72°          1min
第五步到第七步25个循环
8    72°          10min
9    10°          ∞

这个程序是以前用过的Taq酶的touchdown，你可以参考一下
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loveming313
11楼2015-09-10 13:34:14
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顾在

新虫 (初入文坛)
★
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你这是做什么实验用的呢，循环数也没有，退火温度是与引物相关，而延伸时间与扩增片段大小相关，大概只知道是两步pcr
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2楼2015-09-09 17:42:10
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枭翔

金虫 (正式写手)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
降落PCR，第5步应该10个循环，第9步应该25个循环。
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3楼2015-09-09 18:51:40
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loveming313

新虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by 顾在 at 2015-09-09 17:42:10
你这是做什么实验用的呢，循环数也没有，退火温度是与引物相关，而延伸时间与扩增片段大小相关，大概只知道是两步pcr

是突变型小鼠鉴定用的，扩增片段为850bp 和666bp,循环数第一个是10，第二个是28.
我不知道第4部后面0.5C per cycle 是什么意思？
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4楼2015-09-10 08:01:25
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大小白白14楼
2015-09-19 17:47   回复  
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