应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » PCR相关 » 扩增GC含量高的片段
121/2返回列表12下一页
查看: 3471  |  回复: 11
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看

胡啊胡

新虫 (初入文坛)

[求助] 扩增GC含量高的片段 已有7人参与

本人新手，最近扩增一段500 bp的片段，GC含量70％，用了GC buffer 但是条带很弱，达不到测序标准，求助各位大神？这种情况该怎么办？

发自小木虫Android客户端
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
1楼 2015-08-29 11:16:44
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

bright8

铁杆木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
能上电泳图片么？我最近也在克隆gc含量高达80%的片段。

发自小木虫Android客户端
赞一下 回复此楼
2楼2015-08-29 18:26:20
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

迷迭的微笑

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
西门吹雪170: 金币+1, 鼓励回帖交流 2015-08-29 22:55:41
你是用普通的TAKA酶还是专用于GC含量较高的酶，是从总DNA上还是质粒上，GC buffer也有很多，你用的是哪个公司的，这些都有影响。你得具体说说
赞一下 回复此楼
3楼2015-08-29 20:27:11
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

胡啊胡

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
3楼: Originally posted by 迷迭的微笑 at 2015-08-29 20:27:11
你是用普通的TAKA酶还是专用于GC含量较高的酶，是从总DNA上还是质粒上，GC buffer也有很多，你用的是哪个公司的，这些都有影响。你得具体说说

是总DNA,TAKARA的rTaq酶和GC buffer

发自小木虫Android客户端
赞一下 回复此楼
4楼2015-08-31 00:03:31
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

acvhreinlg

银虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
你的PCR条件什么的没写清楚，不知道你的退火温度多少，GC含量高退火温度要提高，我曾经做过GC含量高达85%的，GC buffer是关键，退火温度也很重要

发自小木虫Android客户端
赞一下 回复此楼
科研是将金钱转换为知识的过程，而创新则是将知识转换为金钱的过程。
5楼2015-09-01 06:13:25
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

coelicolor

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
加DMSO。一般25微升加2微升、最高加到4。链霉菌GC就在70%以上。没用过GCbuffer。就KODplus或者2*Taq Mix.退火做梯度吧，56-70。

[ 发自小木虫客户端 ]
赞一下 回复此楼
要有最遥远的梦想
6楼2015-09-01 08:34:30
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

胡啊胡

新虫 (初入文坛)
这个是我试的温度条件，选用了62度，但是还是没达到右边的那种亮度，还能怎么改善条件呢？
扩增GC含量高的片段



发自小木虫Android客户端
赞一下 回复此楼
7楼2015-09-01 14:37:45
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

Ivy尘

新虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

在体系里加1%-4%的DMSO试试。
赞一下 回复此楼
8楼2015-09-01 15:09:20
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

791945301

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

加5%至10%的DMSO

[ 发自小木虫客户端 ]
赞一下 回复此楼
9楼2015-09-01 19:55:28
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

clive931

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

可以在其上下游稍远一点地方先克隆出一段比较好克隆的片段 纯化以后作为模板再克隆目的片段。 楼主可以搜索一下巢式pcr。看看相关方法和原理。

[ 发自小木虫客户端 ]
赞一下 回复此楼
10楼2015-09-01 21:36:47
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 胡啊胡 的主题更新
121/2返回列表12下一页
普通表情 龙 兔 虎 猫
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[基金申请] 咱们一起用铁证分析2026国家社科基金中标与否 +3 启萌科技 2026-08-12 10/500 2026-08-13 20:42 by hmhminy
[基金申请] 欢迎发来filecode的Mz6后的代码验证其规律 +8 医学老男孩 2026-08-13 23/1150 2026-08-13 20:42 by 医学老男孩
[硕博家园] 一作与独作在应聘高校教师时区别大吗 +3 mbygzh 2026-08-08 4/200 2026-08-13 19:31 by 龙-樱
[基金申请] 不应该看fileCode +7 且听虎啸 2026-08-12 9/450 2026-08-13 14:27 by flydreamws
[基金申请] Filecode 又变了，巨变 +3 WH3796 2026-08-12 4/200 2026-08-13 14:13 by 小木虫6752397
[基金申请] 分享一下我之前已中青C的计划书的filecode +4 布布和一二 2026-08-11 5/250 2026-08-13 12:56 by cratir
[基金申请] 关于Filecode分析方法 +9 majunge000 2026-08-10 11/550 2026-08-13 10:40 by ZH远山
[基金申请] 2019年青年基金涵评意见，大家看看几个A，几个B? +11 Tide man 2026-08-11 11/550 2026-08-13 07:35 by 撸猫猫
[基金申请] 应该是93bebmhtak前后十一个字符比较关键 +22 Lanmanbaby 2026-08-09 36/1800 2026-08-12 22:50 by sdfapple719
[基金申请] 奇怪，两个人的filecode固定段从头到尾一模一样 +7 布布和一二 2026-08-10 10/500 2026-08-12 09:12 by 布布和一二
[基金申请] 是这周出结果还是下周出结果？ +3 yuleib84 2026-08-11 3/150 2026-08-11 21:53 by jnhyjjm
[基金申请] 为什么网上很多人说本周 12号出结果 +6 瞬息宇宙 2026-08-10 7/350 2026-08-11 19:25 by Tide man
[硕博家园] 读博的好处 +3 lnee 2026-08-11 3/150 2026-08-11 18:10 by 希望我好好的
[基金申请] 关于代码变化问题，想知道的进来 +17 且听虎啸 2026-08-07 24/1200 2026-08-10 18:35 by zhangduo2008
[基金申请] 据悉今年马上要出结果了 +7 瞬息宇宙 2026-08-10 8/400 2026-08-10 12:42 by Vivilian
[基金申请] 2026国自然放榜时间 +9 布布和一二 2026-08-08 9/450 2026-08-10 11:22 by xxxx2020
[基金申请] 面上项目filecode邪修 +5 西山十月 2026-08-09 7/350 2026-08-10 07:32 by 仁砚薪传
[基金申请] filecode与中标关系的预测 +5 布布和一二 2026-08-07 5/250 2026-08-09 16:15 by 袁向阳007
[基金申请] fileCode有新解读？ +10 Tide man 2026-08-08 18/900 2026-08-09 12:55 by 仁砚薪传
[基金申请] filecode变化情况 +6 布布和一二 2026-08-07 22/1100 2026-08-07 14:45 by 且听虎啸
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭