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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » PCR相关 » 扩增GC含量高的片段
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胡啊胡

新虫 (初入文坛)

[求助] 扩增GC含量高的片段 已有7人参与

本人新手，最近扩增一段500 bp的片段，GC含量70％，用了GC buffer 但是条带很弱，达不到测序标准，求助各位大神？这种情况该怎么办？

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1楼 2015-08-29 11:16:44
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coelicolor

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
加DMSO。一般25微升加2微升、最高加到4。链霉菌GC就在70%以上。没用过GCbuffer。就KODplus或者2*Taq Mix.退火做梯度吧，56-70。

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要有最遥远的梦想
6楼2015-09-01 08:34:30
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bright8

铁杆木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
能上电泳图片么？我最近也在克隆gc含量高达80%的片段。

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2楼2015-08-29 18:26:20
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迷迭的微笑

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
西门吹雪170: 金币+1, 鼓励回帖交流 2015-08-29 22:55:41
你是用普通的TAKA酶还是专用于GC含量较高的酶，是从总DNA上还是质粒上，GC buffer也有很多，你用的是哪个公司的，这些都有影响。你得具体说说
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3楼2015-08-29 20:27:11
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胡啊胡

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
3楼: Originally posted by 迷迭的微笑 at 2015-08-29 20:27:11
你是用普通的TAKA酶还是专用于GC含量较高的酶，是从总DNA上还是质粒上，GC buffer也有很多，你用的是哪个公司的，这些都有影响。你得具体说说

是总DNA,TAKARA的rTaq酶和GC buffer

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4楼2015-08-31 00:03:31
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