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胡啊胡

新虫 (初入文坛)

[求助] 扩增GC含量高的片段 已有7人参与

本人新手,最近扩增一段500 bp的片段,GC含量70%,用了GC buffer 但是条带很弱,达不到测序标准,求助各位大神?这种情况该怎么办?

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clive931

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

可以在其上下游稍远一点地方先克隆出一段比较好克隆的片段 纯化以后作为模板再克隆目的片段。 楼主可以搜索一下巢式pcr。看看相关方法和原理。

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10楼2015-09-01 21:36:47
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bright8

铁杆木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
能上电泳图片么?我最近也在克隆gc含量高达80%的片段。

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2楼2015-08-29 18:26:20
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迷迭的微笑

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖


感谢参与,应助指数 +1
西门吹雪170: 金币+1, 鼓励回帖交流 2015-08-29 22:55:41
你是用普通的TAKA酶还是专用于GC含量较高的酶,是从总DNA上还是质粒上,GC buffer也有很多,你用的是哪个公司的,这些都有影响。你得具体说说
3楼2015-08-29 20:27:11
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胡啊胡

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
3楼: Originally posted by 迷迭的微笑 at 2015-08-29 20:27:11
你是用普通的TAKA酶还是专用于GC含量较高的酶,是从总DNA上还是质粒上,GC buffer也有很多,你用的是哪个公司的,这些都有影响。你得具体说说

是总DNA,TAKARA的rTaq酶和GC buffer

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4楼2015-08-31 00:03:31
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