应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » PCR相关 » 跪求大神指点关于ppic9k载体在酵母中表达
北京石油化工学院2026年研究生招生接收调剂公告
171/2返回列表12下一页
查看: 1815  |  回复: 16
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看

肉肉肉.

铁虫 (小有名气)

[求助] 跪求大神指点关于ppic9k载体在酵母中表达 已有3人参与

各位大神好，本人分子生物小菜鸟一个。想请教一下关于蛋白用ppic9k这个载体在毕赤酵母中表达方面的知识。
之前我用Bgl2这个酶线性化，毕赤酵母表达手册里面说用这个酶线性化之后电转化酵母得到的是Mut+表型，提取酵母基因组鉴定，用AOX1通用引物时理论上应该能得到两个条带，一个是完整的AOX1基因片段，一个是目的基因片段加上470bp，我的目的基因是500bp左右，因此还有一条条带应该是1000bp左右。结果我的电泳结果显示只有一条1000bp左右的条带，这正常吗？这是为什么呢？
然后我再用目的片段的特异性引物做的验证，电泳结果有一条很目的片段大小差不多的500bp左右的条带。这样我能接着往下进行试验吗？这个现象好像是Muts表型啊。听说Muts表型表达比较慢，是有多慢呢？
问题有点蠢，希望大神多多包涵！

[ 发自手机版 http://muchong.com/3g ]
回复此楼

» 收录本帖的淘帖专辑推荐

蛋白表达纯化鉴定精华

» 猜你喜欢

» 本主题相关商家推荐: (我也要在这里推广)
1楼 2015-08-26 17:32:30
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
回帖支持 ( 显示支持度最高的前 50 名 )

evil丶zero

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

我也是做毕赤酵母Ppic 9K的表达。不知道你现在做的怎么样了？
表达手册上有MUTS的生长描述MM培养基上处于对数期MUT+的倍增时间为4-6小时
muts为18小时
另外，菌种不同时间也有差异。
赞一下(2人) 回复此楼

» 本帖已获得的红花（最新10朵）

肉肉肉.
9楼2015-11-06 16:02:40
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
普通回帖

肉肉肉.

铁虫 (小有名气)
哎呀我说错了 我线性化用的是Sal1这个酶

[ 发自手机版 http://muchong.com/3g ]
赞一下 回复此楼
2楼2015-08-26 17:59:33
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

肉肉肉.

铁虫 (小有名气)
内容已删除
回复此楼
3楼2015-08-27 11:33:46
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

肉肉肉.

铁虫 (小有名气)
来人啊
回复此楼
4楼2015-08-27 15:34:22
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

halfbeer

捐助贵宾 (小有名气)

这是啥？
我想问下，你是怎么提的酵母基因组啊，谢谢
赞一下 回复此楼
现在我们能做的就是努力努力再努力
5楼2015-09-07 08:26:26
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

-字仲康

禁虫 (正式写手)
本帖内容被屏蔽
6楼2015-10-16 11:06:59
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

-字仲康

禁虫 (正式写手)
本帖内容被屏蔽
7楼2015-10-16 11:07:47
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

-字仲康

禁虫 (正式写手)
本帖内容被屏蔽
8楼2015-10-16 11:09:31
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

uranuser

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

就应该是一个条带吧？因为你已经把目的片段转入了基因组，在组氨酸平板上长出的就是含有目的基因的菌。
另外，Muts型慢也不要紧，关键是表达量，如果Muts型表达量比Mut+型高，那就用Muts型
赞一下 回复此楼

» 本帖已获得的红花（最新10朵）

肉肉肉.
10楼2015-11-13 09:53:52
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 肉肉肉. 的主题更新
171/2返回列表12下一页
普通表情 龙 兔 虎 猫
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 化学工程085602 305分求调剂 +22 RichLi_ 2026-03-25 22/1100 2026-03-29 19:51 by 无际的草原
[考研] 一志愿南航 335分 | 0856 | GPA 4.07 | 有科研经历 +7 cccchenso 2026-03-29 7/350 2026-03-29 15:00 by 唐沐儿
[考研] 求收留 +5 1943443204 2026-03-28 5/250 2026-03-29 12:11 by 无际的草原
[考研] 340求调剂 +6 Amber00 2026-03-26 6/300 2026-03-29 12:06 by 无际的草原
[考研] 318一志愿吉林大学生物与医药 求调剂 +4 笃行致远. 2026-03-28 4/200 2026-03-29 11:55 by longlotian
[考研] 330分求调剂 +5 qzenlc 2026-03-29 5/250 2026-03-29 07:37 by 无际的草原
[硕博家园] 招收生物学/细胞生物学调剂 +4 IceGuo 2026-03-26 5/250 2026-03-29 01:25 by griffith2014
[考研] 一志愿211 初试270分 求调剂 +8 谷雨上岸 2026-03-23 9/450 2026-03-29 01:00 by 我是小康
[考研] 311（085601）求调剂 +4 liziyeyeye 2026-03-28 4/200 2026-03-28 18:50 by 535743368
[考研] 085600，材料与化工321分求调剂 +9 大馋小子 2026-03-28 9/450 2026-03-28 14:56 by 神马都不懂
[考研] 0703本科郑州大学求调剂 +3 nhj_ 2026-03-25 3/150 2026-03-28 13:24 by Iveryant
[材料工程] 一志愿C9材料与化工专业总分300求调剂 +8 曼111 2026-03-24 9/450 2026-03-28 07:58 by YYYYX1234
[考研] 291求调剂 +6 HanBeiNingZC 2026-03-24 6/300 2026-03-28 07:55 by baoball
[考研] 08开头275求调剂 +4 拉谁不重要 2026-03-26 4/200 2026-03-27 14:12 by Delta2012
[考研] 调剂 +3 李嘉图·S·路 2026-03-27 3/150 2026-03-27 11:19 by wangjy2002
[考研] 324求调剂 +8 hanamiko 2026-03-26 10/500 2026-03-27 08:06 by hypershenger
[考研] 机械学硕310分，数一英一，一志愿211本科双非找调剂信息 +3 @357 2026-03-25 3/150 2026-03-26 16:34 by by.MENG
[考研] 一志愿河工大 081700 276求调剂 +4 地球绕着太阳转 2026-03-23 4/200 2026-03-26 14:27 by zzll406
[考研] 290分调剂求助 +3 吉祥止止陈 2026-03-25 3/150 2026-03-25 19:58 by barlinike
[考研] 085404电子信息284分求调剂 +4 13659058978 2026-03-24 4/200 2026-03-24 12:15 by syl20081243
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭