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hellololo

金虫 (小有名气)

[求助] 蛋白表达出来大小不对问题 已有2人参与

请教各位虫友，我有一个蛋白大肠表达出来SDS-PAGE检测蛋白大小比预测和文献报道的大了10多KDa，loading buffer里面加了巯基乙醇，会不会还是二聚体形成的问题呢？如何确定是不是形成了二聚体呢？
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1楼 2015-08-25 19:10:11
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hellololo

金虫 (小有名气)
然后我想将这个蛋白做毕赤酵母分泌性表达，但是一直表达不出来，会不会是糖基化位点修饰造成的呢？请问有过这方面文献报道吗
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2楼2015-08-25 19:13:17
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a86052

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
hellololo: 金币+2, ★★★很有帮助 2015-08-26 10:31:09
表达量如何？先确定是你的蛋白，western或者质谱什么的~通过分析超离、native-page检测聚合状态~
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3楼2015-08-26 09:31:35
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535390882

铁虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
hellololo: 金币+2, ★★★很有帮助 2015-08-26 10:31:28
首先，大肠杆菌里面没有糖基化这种功能，因此可以排除糖基化导致蛋白变大的可能性。
其次，基本上根据你的基因序列翻译出来的蛋白有多大就有多大喽，还有载体上可能带有的标签什么的会让蛋白变大。
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4楼2015-08-26 10:25:35
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hellololo

金虫 (小有名气)
引用回帖:
3楼: Originally posted by a86052 at 2015-08-26 09:31:35
表达量如何？先确定是你的蛋白，western或者质谱什么的~通过分析超离、native-page检测聚合状态~

大肠表达量还可以，并且后面实验也确定就是目的蛋白，就是大小问题，你说的这些方法我可以试试看，谢谢你啦
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5楼2015-08-26 10:31:03
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hellololo

金虫 (小有名气)
引用回帖:
4楼: Originally posted by 535390882 at 2015-08-26 10:25:35
首先，大肠杆菌里面没有糖基化这种功能，因此可以排除糖基化导致蛋白变大的可能性。
其次，基本上根据你的基因序列翻译出来的蛋白有多大就有多大喽，还有载体上可能带有的标签什么的会让蛋白变大。

感谢朋友的回复，是的，大肠表达没有糖基化修饰，我说的是毕赤酵母表达，真核的，不知道糖基化对这个酵母表达有没有影响
标签我也计算在内了，但是就是大了10多KDa，真的很奇怪
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6楼2015-08-26 10:33:17
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