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jingmi

新虫 (正式写手)

【答案】应助回帖


感谢参与,应助指数 +1
呦呦奶茶: 金币+1, ★★★很有帮助, 谢谢,果然是电压的问题 2015-08-26 22:03:09
marker都不行。估计是跑胶的事。电流电场有问题。重新配置缓冲液试试

[ 发自小木虫客户端 ]
21楼2015-08-26 20:39:04
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呦呦奶茶

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
3楼: Originally posted by xiadongliang at 2015-08-25 14:10:18
胶有问题吧。

今天做的100v的,终于出结果了,是电压的问题,谢谢你啦!
22楼2015-08-26 21:56:27
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呦呦奶茶

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
12楼: Originally posted by amay0001 at 2015-08-26 09:38:15
PCR: 退火温度就定56度,先看到条带再说
胶:我买过299的微波炉,跟导师商量一下还是配一个吧,很影响进度的。片段多大?2%的浓度太高了,一般200bp的1%的胶PCR产物没问题。
上样:PCR产物一般DNA浓度高,上样量3 ...

谢谢,今天用的1.5%的胶,100v电压,做出来的条带很清晰
23楼2015-08-26 21:59:34
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呦呦奶茶

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
19楼: Originally posted by WOAIDACHANG at 2015-08-26 15:00:07
重新设计引物,优化反应条件

谢谢,今天减小了胶的浓度,增加了电压,条带跑的很清晰
24楼2015-08-26 22:01:18
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lcuwxy

铜虫 (小有名气)

你加了marker?哪条带是?如果加了marker也是这样子,就应该是跑胶的问题了。重新跑一下试试吧。另外提醒你一下,循环数不是越多越好的,我们试过循环数30和25,在我们P的那个基因以及条件下,25个循环甚至20个循环都可以出很漂亮的带,但是如果循环数加到30 ,就会出现很严重的拖尾,就跟你跑出来的样子似的。所以先排除跑胶的问题,跑胶加个阳参。如果不是跑胶的问题,再去优化条件。
25楼2015-08-26 22:37:36
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yaohuaibing

铁杆木虫 (著名写手)

电压调到150 试试
每天都在读书和读人。书易懂,人难解。
26楼2015-08-27 18:02:36
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cynlicious

新虫 (小有名气)

引用回帖:
25楼: Originally posted by lcuwxy at 2015-08-26 22:37:36
你加了marker?哪条带是?如果加了marker也是这样子,就应该是跑胶的问题了。重新跑一下试试吧。另外提醒你一下,循环数不是越多越好的,我们试过循环数30和25,在我们P的那个基因以及条件下,25个循环甚至20个循环 ...

你好,想请教一个问题:我刚做了跑胶,marker看不出来。我的胶是这样配置的:1%的琼脂糖凝胶,微波炉加热。之后加入6微升的gengreen核酸燃料。
首先我的TBE溶液时刚买的,溶解琼脂糖的时候也完全溶解了,就是那个gengreen和marker,那个放了快一年的时间,不知道是不是因为过期失效了。
非常感谢
气顺,心顺,事顺。不要有功利心,耶!
27楼2015-09-07 21:25:35
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lcuwxy

铜虫 (小有名气)

引用回帖:
27楼: Originally posted by cynlicious at 2015-09-07 21:25:35
你好,想请教一个问题:我刚做了跑胶,marker看不出来。我的胶是这样配置的:1%的琼脂糖凝胶,微波炉加热。之后加入6微升的gengreen核酸燃料。
首先我的TBE溶液时刚买的,溶解琼脂糖的时候也完全溶解了,就是那个 ...

具体怎么样我也不敢断定,你可以自己分析下,如果可以看见条带,只是marker 看不见,有可能是marker失效了,如果你所有条带都很模糊,就有可能是你的genegreen 失效。
28楼2015-09-07 22:08:06
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cynlicious

新虫 (小有名气)

引用回帖:
28楼: Originally posted by lcuwxy at 2015-09-07 22:08:06
具体怎么样我也不敢断定,你可以自己分析下,如果可以看见条带,只是marker 看不见,有可能是marker失效了,如果你所有条带都很模糊,就有可能是你的genegreen 失效。...

非常感谢
气顺,心顺,事顺。不要有功利心,耶!
29楼2015-09-08 09:16:47
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遗忘的浅海

新虫 (小有名气)

胶有问题,胶一定要溶解完全,然后倒入胶槽一定要快,这胶一看就不行,然后也有可能产物太亮,marker看不出来。
30楼2015-09-10 14:25:36
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