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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » PCR相关 » 求助求助，PCR电泳跑成这样，是什么原因呢。新手刚开始做。marker也看不出来。
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jingmi

新虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
呦呦奶茶: 金币+1, ★★★很有帮助, 谢谢，果然是电压的问题 2015-08-26 22:03:09
marker都不行。估计是跑胶的事。电流电场有问题。重新配置缓冲液试试

[ 发自小木虫客户端 ]
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21楼2015-08-26 20:39:04
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呦呦奶茶

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
3楼: Originally posted by xiadongliang at 2015-08-25 14:10:18
胶有问题吧。

今天做的100v的，终于出结果了，是电压的问题，谢谢你啦！
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22楼2015-08-26 21:56:27
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呦呦奶茶

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
12楼: Originally posted by amay0001 at 2015-08-26 09:38:15
PCR: 退火温度就定56度，先看到条带再说
胶：我买过299的微波炉，跟导师商量一下还是配一个吧，很影响进度的。片段多大？2%的浓度太高了，一般200bp的1%的胶PCR产物没问题。
上样：PCR产物一般DNA浓度高，上样量3 ...

谢谢，今天用的1.5%的胶，100v电压，做出来的条带很清晰
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23楼2015-08-26 21:59:34
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呦呦奶茶

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
19楼: Originally posted by WOAIDACHANG at 2015-08-26 15:00:07
重新设计引物，优化反应条件

谢谢，今天减小了胶的浓度，增加了电压，条带跑的很清晰
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24楼2015-08-26 22:01:18
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lcuwxy

铜虫 (小有名气)
你加了marker？哪条带是？如果加了marker也是这样子，就应该是跑胶的问题了。重新跑一下试试吧。另外提醒你一下，循环数不是越多越好的，我们试过循环数30和25，在我们P的那个基因以及条件下，25个循环甚至20个循环都可以出很漂亮的带，但是如果循环数加到30 ，就会出现很严重的拖尾，就跟你跑出来的样子似的。所以先排除跑胶的问题，跑胶加个阳参。如果不是跑胶的问题，再去优化条件。
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25楼2015-08-26 22:37:36
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yaohuaibing

铁杆木虫 (著名写手)
电压调到150 试试
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每天都在读书和读人。书易懂，人难解。
26楼2015-08-27 18:02:36
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cynlicious

新虫 (小有名气)
引用回帖:
25楼: Originally posted by lcuwxy at 2015-08-26 22:37:36
你加了marker？哪条带是？如果加了marker也是这样子，就应该是跑胶的问题了。重新跑一下试试吧。另外提醒你一下，循环数不是越多越好的，我们试过循环数30和25，在我们P的那个基因以及条件下，25个循环甚至20个循环 ...

你好，想请教一个问题：我刚做了跑胶，marker看不出来。我的胶是这样配置的：1%的琼脂糖凝胶，微波炉加热。之后加入6微升的gengreen核酸燃料。
首先我的TBE溶液时刚买的，溶解琼脂糖的时候也完全溶解了，就是那个gengreen和marker，那个放了快一年的时间，不知道是不是因为过期失效了。
非常感谢
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气顺，心顺，事顺。不要有功利心，耶！
27楼2015-09-07 21:25:35
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lcuwxy

铜虫 (小有名气)
引用回帖:
27楼: Originally posted by cynlicious at 2015-09-07 21:25:35
你好，想请教一个问题：我刚做了跑胶，marker看不出来。我的胶是这样配置的：1%的琼脂糖凝胶，微波炉加热。之后加入6微升的gengreen核酸燃料。
首先我的TBE溶液时刚买的，溶解琼脂糖的时候也完全溶解了，就是那个 ...

具体怎么样我也不敢断定，你可以自己分析下，如果可以看见条带，只是marker 看不见，有可能是marker失效了，如果你所有条带都很模糊，就有可能是你的genegreen 失效。
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28楼2015-09-07 22:08:06
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cynlicious

新虫 (小有名气)
引用回帖:
28楼: Originally posted by lcuwxy at 2015-09-07 22:08:06
具体怎么样我也不敢断定，你可以自己分析下，如果可以看见条带，只是marker 看不见，有可能是marker失效了，如果你所有条带都很模糊，就有可能是你的genegreen 失效。...

非常感谢
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气顺，心顺，事顺。不要有功利心，耶！
29楼2015-09-08 09:16:47
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遗忘的浅海

新虫 (小有名气)
胶有问题，胶一定要溶解完全，然后倒入胶槽一定要快，这胶一看就不行，然后也有可能产物太亮，marker看不出来。
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30楼2015-09-10 14:25:36
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