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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » PCR相关 » 求助求助，PCR电泳跑成这样，是什么原因呢。新手刚开始做。marker也看不出来。
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Z.Ada

铁虫 (小有名气)
应该是胶的问题，我用的是1%，100V的，多做几次就好了，刚开始问题多正常，Fighting

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11楼2015-08-26 09:15:41
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amay0001

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
呦呦奶茶: 金币+1, ★★★很有帮助 2015-08-26 21:58:35
PCR: 退火温度就定56度，先看到条带再说
胶：我买过299的微波炉，跟导师商量一下还是配一个吧，很影响进度的。片段多大？2%的浓度太高了，一般200bp的1%的胶PCR产物没问题。
上样：PCR产物一般DNA浓度高，上样量3-5ul看结果即可
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12楼2015-08-26 09:38:15
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呦呦奶茶

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
9楼: Originally posted by 半醒半梦 at 2015-08-26 01:02:09
marker没出来，说明胶有问题，检查配胶电泳液，电泳槽电泳液换新的，煮胶让琼脂糖完全融化。

OK，谢谢啦！今天再试试。。

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13楼2015-08-26 09:41:48
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535390882

铁虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
有没有怀疑过MIX的问题？ 质量太差的MIX会导致特异性差等问题
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14楼2015-08-26 10:00:55
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929519755

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
你染色的时候，有没有问题？拿什么染色的
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想你没话说
15楼2015-08-26 10:08:39
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呦呦奶茶

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
12楼: Originally posted by amay0001 at 2015-08-26 09:38:15
PCR: 退火温度就定56度，先看到条带再说
胶：我买过299的微波炉，跟导师商量一下还是配一个吧，很影响进度的。片段多大？2%的浓度太高了，一般200bp的1%的胶PCR产物没问题。
上样：PCR产物一般DNA浓度高，上样量3 ...

我正在试呢，用1%和1.5%都试试，100V，但愿能有个好结果。

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16楼2015-08-26 11:58:27
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呦呦奶茶

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
15楼: Originally posted by 929519755 at 2015-08-26 10:08:39
你染色的时候，有没有问题？拿什么染色的

是BioTake的核酸染料

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17楼2015-08-26 12:01:39
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呦呦奶茶

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
14楼: Originally posted by 535390882 at 2015-08-26 10:00:55
有没有怀疑过MIX的问题？ 质量太差的MIX会导致特异性差等问题

还真没怀疑过，我用的lifefeng的含燃料的Mix，今天再试试，不行明天借同学的再试试。

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18楼2015-08-26 12:06:49
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WOAIDACHANG

禁言 (正式写手)
本帖内容被屏蔽
19楼2015-08-26 15:00:07
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呀薯条

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★
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呦呦奶茶: 金币+1, ★★★很有帮助, 谢谢哦，今天重新改了胶浓度和电压，做出来的结果还不错 2015-08-26 22:02:32
marker都看不到的话，我也出现过，发现可能是以下原因造成的：染色液没有充分溶解或混匀；也可能是染色液质量问题。我就是因为染色液的质量问题，那一阵电泳一直没结果，后来换了一种立马清楚。
电泳时，最好确保胶彻底凝固好再使用
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20楼2015-08-26 19:12:53
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