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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 分子生理 » 做 western blot 的 GAPDH 内参，总有杂带
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alsaith

新虫 (初入文坛)

[求助] 做 western blot 的 GAPDH 内参，总有杂带 已有2人参与

已经做了一个多月的 GAPDH 内参，总是有杂带，我用的是 bioworlde 品牌的一抗，说明书上建议的浓度是 1:5000—1:15000。我第一次做的时候是用 1:5000，结果是有明显的杂带，而且杂带和我要的条带矮得很近；第二次做是 1:7000，杂带明显且与所要条带距离很近；第三次，重新配置一抗，换了一组样，其他条件和前两次一样，条带表带效果不好，但是杂带没有了；从第四次开始，次次出现杂带，而且第四次我的样品和方法与第三次相同。我试了很多方法，比如说增加浓缩胶、加大封闭时间、用封闭液配置一抗，单仍然有杂带......求助各位大神，怎样才能解决，我今年研一刚结束，刚做了一年western，望帮助QAQ
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1楼 2015-08-24 16:54:36
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alsaith

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
2楼: Originally posted by haihang528 at 2015-08-25 23:54:39
是下面有条浅浅的条带吗？如果是应该问题不大。。我的每次都有，而且和主条带的深浅趋势一致，恰好可以做个参考。。。

和主条带分不开，有重叠部分，而且关键是，它颜色也不浅QAQ，发愁ing

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3楼2015-08-26 13:46:29
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haihang528

铁虫 (初入文坛)
是下面有条浅浅的条带吗？如果是应该问题不大。。我的每次都有，而且和主条带的深浅趋势一致，恰好可以做个参考。。。
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生物工程制药方向的有志青年。。
2楼2015-08-25 23:54:39
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fuyuandj86

版主 (著名写手)

己所不欲，勿施于人

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
抗体特异性差什么招都没用。
换抗体吧，去隔壁的实验室问问他们的内参抗体是哪里买的
买已经和HRP偶联的GAPDH抗体，稍微好点，还省得用二抗。
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The doer of good becomes good, the doer of evil becomes evil.
4楼2015-08-27 09:01:07
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alsaith

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
4楼: Originally posted by fuyuandj86 at 2015-08-27 09:01:07
抗体特异性差什么招都没用。
换抗体吧，去隔壁的实验室问问他们的内参抗体是哪里买的
买已经和HRP偶联的GAPDH抗体，稍微好点，还省得用二抗。

我也准备去借一点儿先试试，是不是抗体的问题QAQ，谢谢～

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5楼2015-08-27 15:25:20
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