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做western blotting用的抗体
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做原核表达和western blotting用抗体 以检测转基因植物和表达分析 首先把目的基因的片段连在PET-32a中 我是从cDNA中扩增然后酶切PCR产物连接在载体上的 然后送到公司测序 送了4个克隆 结果发现4个克隆相差4-6个碱基 翻译成氨基酸以后也有小差别 但不是在基本结构域内 其中测序的有一个结果好一点 和转基因植株插入序列编码氨基酸差了一个 一个是A，一个是T 我不知道自己做抗体对载体序列的要求 有些许差异会导致严重后果吗 请大虾们赐教  |
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apple6299
铁杆木虫 (正式写手)
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【答案】应助回帖
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dhd997(金币+2): 鼓励交流 2011-08-10 16:20:48
lxjwishes(金币+3): 恩，荧光已经做了，现在就是想看看蛋白水平的，我的意思是大肠杆菌原核表达出来的蛋白氨基酸序列如果和转基因植物中的氨基酸有小差异会导致实验失败吗？ 2011-08-11 15:47:54
lxjwishes(金币+5): thanks 2011-08-15 21:56:48
lxjwishes(金币+2): 2011-09-13 16:05:13
dhd997(金币+2): 鼓励交流 2011-08-10 16:20:48
lxjwishes(金币+3): 恩，荧光已经做了，现在就是想看看蛋白水平的，我的意思是大肠杆菌原核表达出来的蛋白氨基酸序列如果和转基因植物中的氨基酸有小差异会导致实验失败吗？ 2011-08-11 15:47:54
lxjwishes(金币+5): thanks 2011-08-15 21:56:48
lxjwishes(金币+2): 2011-09-13 16:05:13
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碱基突变？对后续的表达会不会造成影响的，导致翻译的不准确。 检测基因表达的方法有两个，一个是在蛋白质水平上进行检测，即采用WB，你的是原核表达，加上载体pet上有his标签， 可以用his标签抗体啊 另一个方法是在mRNA水平上采用荧光定量PCR进行 |
2楼2011-08-10 16:08:38