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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » DNA重组 » 无缝克隆连接
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低头哼小调

金虫 (初入文坛)

[求助] 无缝克隆连接 已有3人参与

采用无缝克隆连接启动子和基因，先是用无缝克隆设计的引物扩增启动子和基因，对载体双酶切，然后连接转化，用启动子引物PCR鉴定，大小正确，送测序，启动子融合基因大小为4000bp左右，但测序结果是1000bp左右，请大神指点！！！
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1楼 2015-08-11 10:05:41
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棍子168

至尊木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
西门吹雪170: 金币+1, 鼓励回帖交流 2015-08-22 23:09:41
一般一个测序反应大约就是1000个bp，开头的不可信，大约700个可信。你的4000如果要测通需要6个反应，并且需要有重叠部分，希望能帮到你。

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天道酬勤
2楼2015-08-11 23:54:14
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sky0328

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★
西门吹雪170: 金币+1, 鼓励回帖交流 2015-08-22 23:09:54
1，是否确定你的测序列已经完全测通
2，可以再用个目的基因的引物扩增看看
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3楼2015-08-22 14:19:41
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奋进的女孩

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

引用回帖:
2楼: Originally posted by 棍子168 at 2015-08-11 23:54:14
一般一个测序反应大约就是1000个bp，开头的不可信，大约700个可信。你的4000如果要测通需要6个反应，并且需要有重叠部分，希望能帮到你。

我还想问下您！一般连接后测序是整个测通还是测部分？

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4楼2015-08-24 00:09:43
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棍子168

至尊木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

引用回帖:
4楼: Originally posted by 奋进的女孩 at 2015-08-24 00:09:43
我还想问下您！一般连接后测序是整个测通还是测部分？
...

一般测两端的就行了，如果比较严谨需要测通

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天道酬勤
5楼2015-08-24 00:15:42
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那雨那女孩

新虫 (小有名气)
引用回帖:
5楼: Originally posted by 棍子168 at 2015-08-24 00:15:42
一般测两端的就行了，如果比较严谨需要测通
...

求帮忙，谢谢！！想问一下，无缝克隆的时候，插入基因要考虑阅读框会不会移码吗？
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辟邪
6楼2016-01-19 12:50:16
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棍子168

至尊木虫 (著名写手)
引用回帖:
6楼: Originally posted by 那雨那女孩 at 2016-01-19 12:50:16
求帮忙，谢谢！！想问一下，无缝克隆的时候，插入基因要考虑阅读框会不会移码吗？...

可能会译码，需要考虑译码

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天道酬勤
7楼2016-01-19 15:41:45
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那雨那女孩

新虫 (小有名气)
引用回帖:
7楼: Originally posted by 棍子168 at 2016-01-19 15:41:45
可能会译码，需要考虑译码
...

大神，麻烦帮我看一下下面的问题好吗？谢谢！！
无缝克隆连接
未标题-1.jpg
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辟邪
8楼2016-01-19 21:16:46
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