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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » PCR相关 » PAGE胶梳子和marker的问题。
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阿维victor

银虫 (小有名气)

[交流] PAGE胶梳子和marker的问题。 已有6人参与

1.我做的胶为什么梳子那边很多都凝不起来？试剂问题还是配方问题？凝不起来的话点样都跑到其他点样口了。。。
2.还有如果要一口气点好多块胶，marker怎么样点比较好不容易混淆又不影响正常读胶？
3.点样的时候上一个口的样流了一点到下一个样，跑出来会不会有很大干扰？

我是新手，希望能得到各位的帮助！谢谢！

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fly_锋

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1楼 2015-08-07 18:50:47
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ghqiu09

禁虫 (正式写手)
★
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本帖内容被屏蔽
6楼2015-08-09 19:11:58
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fly_锋

铁虫 (初入文坛)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
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刚好看到您的问题，有点个人经验！一个梳子凝的问题，一方面你可以加大胶的浓度，另外有个小细节就是才洗过的梳子带水也是不容易凝的，您注意点。第二个其实很容易解决，我一般marker都是每排错开。第三个，是很讨厌的问题，而且也是直接影响你结果的，必须的解决，样千万不能混，要是你的孔充裕的话可以几个几个之间隔开空一个孔。希望可以帮到你!
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阿维victor
9楼2015-08-10 11:15:39
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zhangyongzz

木虫 (著名写手)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
Marker可以采取第几块胶点第几个孔，这样不容易hun x

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2楼2015-08-07 23:47:19
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chensi32

新虫 (初入文坛)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
可以加大 TEMED的量多加2到3微升这样可以让胶凝的快一点～还有也许是你凝胶时间不够最低30分钟

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3楼2015-08-08 06:59:16
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阿维victor

银虫 (小有名气)
引用回帖:
3楼: Originally posted by chensi32 at 2015-08-08 06:59:16
可以加大 TEMED的量多加2到3微升这样可以让胶凝的快一点～还有也许是你凝胶时间不够最低30分钟

好的，谢谢指导！

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4楼2015-08-08 15:47:09
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阿维victor

银虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by zhangyongzz at 2015-08-07 23:47:19
Marker可以采取第几块胶点第几个孔，这样不容易hun x

好的！谢谢！

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5楼2015-08-08 15:47:36
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阿维victor

银虫 (小有名气)
引用回帖:
6楼: Originally posted by ghqiu09 at 2015-08-09 19:11:58
第一个问题反正我没碰见过，凝的时间不够长？第二个问题，个人习惯，只要你自己能记住就行了，第三个，看你IB的是什么蛋白了，如果你要IB的蛋白特别强，就不好了，串孔这种事真的很讨厌，解决办法就是摸准自己一个孔 ...

很好的建议！谢谢！我去试试看。

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7楼2015-08-10 07:40:34
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dingyi3363

铜虫 (初入文坛)
★
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1、是琼脂的问题吧
2、一般点中间
3、孔太欠或是样品太多，点出来也看运气
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8楼2015-08-10 08:19:19
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lcuwxy

铜虫 (小有名气)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
胶不凝的原因有很多啊，先检查你的试剂有没有问题，比如PH6.8 8.8的Tris 是不是OK,AP 是不是OK，如果没有问题那就是时间问题,或者操作问题。maker 加的位置我都是放在最左边，记住跑胶的时候胶板的位置，按照从前往后的顺序 1 2 3 4 ，转膜的时候一个一个来，在膜的右下角写上相应的数字，这样转完膜就不用担心会混了。
至于最后一个问题，这要看你跑什么蛋白以及蛋白丰度了，只能说好好做，别让它漏出去。
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阿维victor
10楼2015-08-10 12:29:08
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