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汕头大学海洋科学接受调剂
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晓风眷月

金虫 (正式写手)

[求助] HPLC样品出峰与流动相的关系 已有6人参与

前段时间用HPLC做个样品,这个样品在水中是可溶的,在乙腈中比较难溶,然后师姐在做这个样的时候跟我说,要把水的比例调大些,更容易出峰,此时,我有点困惑,因为一直都认为在反相柱里,乙腈这种相比水来说极性小的比例越大不是应该更早出峰么,而在分离两种化合物的时候,在确定用反相柱之后,出峰顺序不也应该只是跟化合物本身的极性有关,而与流动相比例是无关的么?我认识有什么误区么?求解
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ethernet3399

新虫 (小有名气)

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你的认识仅停留在理论上。实际操作时也要考虑到流动相对于物质的溶解度。试想,如果一个物质在流动相中不溶解,会出峰吗?第二,出峰顺序理论上与化合物极性有关,但是换不同的色谱柱可能峰位颠倒,这又作何解释呢?所以理论是一方面,但是不可以绝对化,毕竟是实验科学。

[ 发自小木虫客户端 ]
3楼2015-08-02 05:56:01
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liuhaifen

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

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出峰时间和多种因素有关,流动相组成及其比例,柱子类型,柱温,流速这些都是有关系的,建议在具体实验前先做个HPLC实验条件优化。
5楼2015-08-02 15:49:01
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hudreamy

铁杆木虫 (职业作家)

你师姐的意思是增加溶解性,所以水的比例高些,这样也防止你的样品在柱子中析出来把柱子堵了,出峰时间和流动相是肯定有关系的,你可以实践一下,用不同的流动相比例走一下就知道了
7楼2015-08-03 00:03:04
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普通回帖

猫猫爱吃小鱼

新虫 (初入文坛)

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样品出峰时间与色谱柱也有关系
2楼2015-07-31 17:12:15
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727701445

银虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

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出峰时间当然和流动相的比例有关啊,流动相的比例不同或者比例阀出故障,出峰时间都会改变的
4楼2015-08-02 15:44:35
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晓风眷月

金虫 (正式写手)

引用回帖:
3楼: Originally posted by ethernet3399 at 2015-08-02 05:56:01
你的认识仅停留在理论上。实际操作时也要考虑到流动相对于物质的溶解度。试想,如果一个物质在流动相中不溶解,会出峰吗?第二,出峰顺序理论上与化合物极性有关,但是换不同的色谱柱可能峰位颠倒,这又作何解释呢? ...

那么现在色谱柱确定是反相的了之后,如果一个化合物易溶于水难溶于乙腈,那么是否水相多点更容易出峰呢?
感性大于理性的理科人
6楼2015-08-02 22:28:15
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ethernet3399

新虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

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引用回帖:
6楼: Originally posted by 晓风眷月 at 2015-08-02 22:28:15
那么现在色谱柱确定是反相的了之后,如果一个化合物易溶于水难溶于乙腈,那么是否水相多点更容易出峰呢?...

这个不好说,按道理,水是没有什么洗脱能力的,在反相色谱中。样品在乙腈中溶解度低,也不至于一点也不溶解吧?比如1mg/ml的溶解度可以满足吗?你应该是做分析对吧?我在做分离纯化时遇到很多例子,出峰后样品在试管中析出,出峰也还正常。不过这样确实有风险。就你的这个例子,你可以试试看,我认为还是应该增加乙腈的比例才能把样品洗脱下来,或者样品在甲醇中溶解度怎样?是否可以把有机相换成甲醇

[ 发自小木虫客户端 ]
8楼2015-08-03 06:53:48
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da1234mao

铁虫 (著名写手)

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回一个,反项中原理跟你说的一致,更容易岀峰不知道表述什么,更多的水分可能岀峰时间更合适的保留时间。当然考虑下堵柱子的情况,比如氯化钠这种。

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9楼2015-08-03 08:38:07
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萌萌的怪阿姨

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
6楼: Originally posted by 晓风眷月 at 2015-08-02 22:28:15
那么现在色谱柱确定是反相的了之后,如果一个化合物易溶于水难溶于乙腈,那么是否水相多点更容易出峰呢?...

更容易出峰和更快出峰是两回事吧
水的比例增大,溶解度更高,那么峰应该会比较大
你的柱子是反相色谱柱,水的比例增大,流动相极性更大了,出峰会变慢
这是我个人的理解,你在理一下思路,看是不是这么回事
10楼2015-08-03 11:19:26
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