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北京石油化工学院2026年研究生招生接收调剂公告
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wangd556

[交流] 【求助】求助:HPLC定量,得出无法解释的结果? 已有1人参与

第一次用HPLC定量,得出无法解释的结果,请各位大侠帮忙.

用A物质标准品(固体粉末),ddw制成0.5mg/ml溶液,分别进样5ul,10ul,15ul,20ul,25ul,30ul,50ul进行 HPLC,根据标准品HPLC检测时的峰高,制得峰高与进样量关系的标准曲线y=31.286x+609.64(R2=0.98)。

将待测样品X(固体粉末),ddw制成0.5mg/ml溶液,进样10ul(质量为5ug),HPLC检测,A物质的峰高为1280.1,根据标准曲线的计算得HPCL检测的10ul X样品中A物质的含量为32ug,可是X物质进行HPLC检测时,进样总质量不过5ug,A物质在其中的含量怎么可能为32ug(〉5ug)呢?

目前,我能够想到的原因:

1,样品配置的时候出现了问题:
但是,A和X物质同时进行称量、配制,都是取20mg样品,溶于200ul ddw,配成100mg/ml母液,然后取5ul母液ddw稀释至1ml,配成0.5mg/ml的检测溶液。如果配制过程有问题,那么两种物质的溶液浓度就会都有问题,不会两者之间有这么大的差异。

2,X样品在A吸收峰的地方,还有另外一种物质的吸收峰:
但是,HPLC的条件(流动相中有机相和无机相的配比)做过多次改动,X物质中A物质出峰时间与A物质标准品的出峰时间总是一致的,没有看见X物质的A峰周围有其它峰出现;并且,X物质的A峰,很犀利,不像夹杂有其它物质。

不知道还有什么问题,我忽略掉了,没有注意,请各位大侠指点。


本试验也用峰面积作过标曲,R2=0.95;而用峰高作标曲时,R2=0.98,线性更好一些。所以后来的试验用的是有关峰高的标准曲线。
另外,即使用峰面积的标曲计算,还是得到同样的结果。
请各位大侠指教。



根据峰高,而做的标准曲线



标准品的HPLC峰图



待测样品X的HPLC峰图
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wangd556

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7.5        861.3
10        945.4
12.5        1011.8
15        1090.7
25        1373.9

以上是做标曲的原始数据


HPLC整个过程采用梯度洗脱,条件是:
time(min)                     乙腈(%)      0.05%三氟乙酸(%)
0                                         10                                    90
8                                         18                                    82
8.1                                      100                                 0
12                                       100                                 0
15                                        10                                  90

210nm检测




求助大家帮助,非常感谢!!!
2楼2010-08-12 13:57:42
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