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【求助】求助：HPLC定量,得出无法解释的结果？ 已有1人参与
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第一次用HPLC定量,得出无法解释的结果,请各位大侠帮忙. 用A物质标准品(固体粉末),ddw制成0.5mg/ml溶液，分别进样5ul，10ul，15ul，20ul，25ul，30ul，50ul进行 HPLC，根据标准品HPLC检测时的峰高，制得峰高与进样量关系的标准曲线y=31.286x+609.64(R2=0.98)。 将待测样品X（固体粉末），ddw制成0.5mg/ml溶液，进样10ul（质量为5ug），HPLC检测，A物质的峰高为1280.1，根据标准曲线的计算得HPCL检测的10ul X样品中A物质的含量为32ug,可是X物质进行HPLC检测时，进样总质量不过5ug,A物质在其中的含量怎么可能为32ug（〉5ug）呢？ 目前，我能够想到的原因： 1，样品配置的时候出现了问题： 但是，A和X物质同时进行称量、配制，都是取20mg样品，溶于200ul ddw，配成100mg/ml母液，然后取5ul母液ddw稀释至1ml,配成0.5mg/ml的检测溶液。如果配制过程有问题，那么两种物质的溶液浓度就会都有问题，不会两者之间有这么大的差异。 2，X样品在A吸收峰的地方，还有另外一种物质的吸收峰： 但是，HPLC的条件（流动相中有机相和无机相的配比）做过多次改动，X物质中A物质出峰时间与A物质标准品的出峰时间总是一致的，没有看见X物质的A峰周围有其它峰出现；并且，X物质的A峰，很犀利，不像夹杂有其它物质。 不知道还有什么问题，我忽略掉了，没有注意，请各位大侠指点。 本试验也用峰面积作过标曲，R2=0.95；而用峰高作标曲时，R2=0.98,线性更好一些。所以后来的试验用的是有关峰高的标准曲线。 另外，即使用峰面积的标曲计算，还是得到同样的结果。 请各位大侠指教。 根据峰高，而做的标准曲线  标准品的HPLC峰图  待测样品X的HPLC峰图  |
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