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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 化学化工区 » 分析 » 色谱质谱 » HPLC样品出峰与流动相的关系
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晓风眷月

金虫 (正式写手)

[求助] HPLC样品出峰与流动相的关系 已有6人参与

前段时间用HPLC做个样品，这个样品在水中是可溶的，在乙腈中比较难溶，然后师姐在做这个样的时候跟我说，要把水的比例调大些，更容易出峰，此时，我有点困惑，因为一直都认为在反相柱里，乙腈这种相比水来说极性小的比例越大不是应该更早出峰么，而在分离两种化合物的时候，在确定用反相柱之后，出峰顺序不也应该只是跟化合物本身的极性有关，而与流动相比例是无关的么？我认识有什么误区么？求解
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感性大于理性的理科人
1楼 2015-07-31 16:12:33
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ethernet3399

新虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

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引用回帖:
6楼: Originally posted by 晓风眷月 at 2015-08-02 22:28:15
那么现在色谱柱确定是反相的了之后，如果一个化合物易溶于水难溶于乙腈，那么是否水相多点更容易出峰呢？...

这个不好说，按道理，水是没有什么洗脱能力的，在反相色谱中。样品在乙腈中溶解度低，也不至于一点也不溶解吧？比如1mg/ml的溶解度可以满足吗？你应该是做分析对吧？我在做分离纯化时遇到很多例子，出峰后样品在试管中析出，出峰也还正常。不过这样确实有风险。就你的这个例子，你可以试试看，我认为还是应该增加乙腈的比例才能把样品洗脱下来，或者样品在甲醇中溶解度怎样？是否可以把有机相换成甲醇

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8楼2015-08-03 06:53:48
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猫猫爱吃小鱼

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
样品出峰时间与色谱柱也有关系
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2楼2015-07-31 17:12:15
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ethernet3399

新虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

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感谢参与，应助指数 +1
你的认识仅停留在理论上。实际操作时也要考虑到流动相对于物质的溶解度。试想，如果一个物质在流动相中不溶解，会出峰吗？第二，出峰顺序理论上与化合物极性有关，但是换不同的色谱柱可能峰位颠倒，这又作何解释呢？所以理论是一方面，但是不可以绝对化，毕竟是实验科学。

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3楼2015-08-02 05:56:01
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727701445

银虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
出峰时间当然和流动相的比例有关啊，流动相的比例不同或者比例阀出故障，出峰时间都会改变的
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4楼2015-08-02 15:44:35
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