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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » PCR相关 » PCR后跑琼脂糖电泳有DNA条带、为什么跑DGGE胶没有任何条带？？（加样20微升）
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小情绪你不懂

金虫 (小有名气)

[求助] PCR后跑琼脂糖电泳有DNA条带、为什么跑DGGE胶没有任何条带？？（加样20微升） 已有1人参与

如题、希望大神指点啊~~
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1楼 2015-07-27 17:54:57
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lance-tan

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
西门吹雪170: 金币+2, 鼓励回帖交流 2015-07-30 23:24:13
1.PCR图片，以及扩增程序，体系，麻烦告知不然没办法分析
2.看你的目的片段是否大于500，如果大于500效果会较差
3.检查下你的DGGE凝胶是否过期
4.是否选择了正确的梯度
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2楼2015-07-28 09:30:55
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小情绪你不懂

金虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by lance-tan at 2015-07-28 09:30:55
1.PCR图片，以及扩增程序，体系，麻烦告知不然没办法分析
2.看你的目的片段是否大于500，如果大于500效果会较差
3.检查下你的DGGE凝胶是否过期
4.是否选择了正确的梯度

PCR 反应体系25微升；PCR反应程序：94度预变性5min，35个循环（94度，1min，56度，30s，72度，1min），最终72度延伸7min；产物经1.2%琼脂糖电泳检测；
我的目的片段大概是450bp；
DGGE所有试剂都木有过期，同一块胶同门都跑出来了（所有操作均一样，样品我的是羊肉，他的是牛肉，但目的片段大概都是450bp）；
DGGE胶是43%-58%，浓缩胶为8%；
谢谢哈~~
PCR后跑琼脂糖电泳有DNA条带、为什么跑DGGE胶没有任何条带？？（加样20微升）
IMG_20150725_181803.jpg
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3楼2015-07-28 10:15:48
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feng37ye

新虫 (初入文坛)
★
西门吹雪170: 金币+1, 鼓励回帖交流 2015-07-30 23:24:38
来交流的。产物浓度不高，若是加了loading buffer后上样20的话样品太少。如果DGGE上样空有亮带的话也可能没有条带。请问DGGE跑了多久？会不会是染色的问题？

[ 发自手机版 http://muchong.com/3g ]
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4楼2015-07-28 16:26:05
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lance-tan

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

引用回帖:
3楼: Originally posted by 小情绪你不懂 at 2015-07-28 10:15:48
PCR 反应体系25微升；PCR反应程序：94度预变性5min，35个循环（94度，1min，56度，30s，72度，1min），最终72度延伸7min；产物经1.2%琼脂糖电泳检测；
我的目的片段大概是450bp；
DGGE所有试剂都木有过期，同一块 ...

1.产物浓度不够，对后续DGGE影响较大
2.看下面都有引物二聚体了，可以适当增加模板浓度，提高一点退火温度试试看
建议把产物浓度调节好再上样，不然也是浪费时间。
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5楼2015-07-29 10:34:38
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小情绪你不懂

金虫 (小有名气)
引用回帖:
4楼: Originally posted by feng37ye at 2015-07-28 16:26:05
来交流的。产物浓度不高，若是加了loading buffer后上样20的话样品太少。如果DGGE上样空有亮带的话也可能没有条带。请问DGGE跑了多久？会不会是染色的问题？
...

这个是琼脂糖电泳、DGGE 加完样200v 10min 后85v14个小时

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6楼2015-07-29 16:24:55
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feng37ye

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
6楼: Originally posted by 小情绪你不懂 at 2015-07-29 16:24:55
这个是琼脂糖电泳、DGGE 加完样200v 10min 后85v14个小时
...

这样看没什么问题。找到原因了吗？

[ 发自手机版 http://muchong.com/3g ]
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7楼2015-07-30 09:59:38
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小情绪你不懂

金虫 (小有名气)
引用回帖:
7楼: Originally posted by feng37ye at 2015-07-30 09:59:38
这样看没什么问题。找到原因了吗？
...

木有呢、重新提DNA了

[ 发自手机版 http://muchong.com/3g ]
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8楼2015-07-30 19:19:26
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小情绪你不懂

金虫 (小有名气)
引用回帖:
5楼: Originally posted by lance-tan at 2015-07-29 10:34:38
1.产物浓度不够，对后续DGGE影响较大
2.看下面都有引物二聚体了，可以适当增加模板浓度，提高一点退火温度试试看
建议把产物浓度调节好再上样，不然也是浪费时间。...

现在退火温度12℃、低了么

[ 发自手机版 http://muchong.com/3g ]
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9楼2015-07-30 19:20:13
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635270fmaifx

铜虫 (初入文坛)
引用回帖:
9楼: Originally posted by 小情绪你不懂 at 2015-07-30 19:20:13
现在退火温度12℃、低了么
...

您好 你的上述问题解决了吗 我的实验也出现如此类问题 pcr产物有明显的亮带 但是DGGE条带很少或者没有  憧憬你的答复 谢谢
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10楼2016-04-21 11:09:21
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