应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » PCR相关 » PCR后跑琼脂糖电泳有DNA条带、为什么跑DGGE胶没有任何条带？？（加样20微升）
北京石油化工学院2026年研究生招生接收调剂公告
101/1返回列表
查看: 1761  |  回复: 9
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看

小情绪你不懂

金虫 (小有名气)

[求助] PCR后跑琼脂糖电泳有DNA条带、为什么跑DGGE胶没有任何条带？？（加样20微升） 已有1人参与

如题、希望大神指点啊~~
回复此楼

» 猜你喜欢
1楼 2015-07-27 17:54:57
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

lance-tan

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
西门吹雪170: 金币+2, 鼓励回帖交流 2015-07-30 23:24:13
1.PCR图片，以及扩增程序，体系，麻烦告知不然没办法分析
2.看你的目的片段是否大于500，如果大于500效果会较差
3.检查下你的DGGE凝胶是否过期
4.是否选择了正确的梯度
赞一下 回复此楼
新手入门求各位大神指导
2楼2015-07-28 09:30:55
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

小情绪你不懂

金虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by lance-tan at 2015-07-28 09:30:55
1.PCR图片，以及扩增程序，体系，麻烦告知不然没办法分析
2.看你的目的片段是否大于500，如果大于500效果会较差
3.检查下你的DGGE凝胶是否过期
4.是否选择了正确的梯度

PCR 反应体系25微升；PCR反应程序：94度预变性5min，35个循环（94度，1min，56度，30s，72度，1min），最终72度延伸7min；产物经1.2%琼脂糖电泳检测；
我的目的片段大概是450bp；
DGGE所有试剂都木有过期，同一块胶同门都跑出来了（所有操作均一样，样品我的是羊肉，他的是牛肉，但目的片段大概都是450bp）；
DGGE胶是43%-58%，浓缩胶为8%；
谢谢哈~~
PCR后跑琼脂糖电泳有DNA条带、为什么跑DGGE胶没有任何条带？？（加样20微升）
IMG_20150725_181803.jpg
赞一下 回复此楼
3楼2015-07-28 10:15:48
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

feng37ye

新虫 (初入文坛)
★
西门吹雪170: 金币+1, 鼓励回帖交流 2015-07-30 23:24:38
来交流的。产物浓度不高，若是加了loading buffer后上样20的话样品太少。如果DGGE上样空有亮带的话也可能没有条带。请问DGGE跑了多久？会不会是染色的问题？

[ 发自手机版 http://muchong.com/3g ]
赞一下 回复此楼
4楼2015-07-28 16:26:05
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

lance-tan

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

引用回帖:
3楼: Originally posted by 小情绪你不懂 at 2015-07-28 10:15:48
PCR 反应体系25微升；PCR反应程序：94度预变性5min，35个循环（94度，1min，56度，30s，72度，1min），最终72度延伸7min；产物经1.2%琼脂糖电泳检测；
我的目的片段大概是450bp；
DGGE所有试剂都木有过期，同一块 ...

1.产物浓度不够，对后续DGGE影响较大
2.看下面都有引物二聚体了，可以适当增加模板浓度，提高一点退火温度试试看
建议把产物浓度调节好再上样，不然也是浪费时间。
赞一下 回复此楼
新手入门求各位大神指导
5楼2015-07-29 10:34:38
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

小情绪你不懂

金虫 (小有名气)
引用回帖:
4楼: Originally posted by feng37ye at 2015-07-28 16:26:05
来交流的。产物浓度不高，若是加了loading buffer后上样20的话样品太少。如果DGGE上样空有亮带的话也可能没有条带。请问DGGE跑了多久？会不会是染色的问题？
...

这个是琼脂糖电泳、DGGE 加完样200v 10min 后85v14个小时

[ 发自手机版 http://muchong.com/3g ]
赞一下 回复此楼
6楼2015-07-29 16:24:55
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

feng37ye

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
6楼: Originally posted by 小情绪你不懂 at 2015-07-29 16:24:55
这个是琼脂糖电泳、DGGE 加完样200v 10min 后85v14个小时
...

这样看没什么问题。找到原因了吗？

[ 发自手机版 http://muchong.com/3g ]
赞一下 回复此楼
7楼2015-07-30 09:59:38
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

小情绪你不懂

金虫 (小有名气)
引用回帖:
7楼: Originally posted by feng37ye at 2015-07-30 09:59:38
这样看没什么问题。找到原因了吗？
...

木有呢、重新提DNA了

[ 发自手机版 http://muchong.com/3g ]
赞一下 回复此楼
8楼2015-07-30 19:19:26
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

小情绪你不懂

金虫 (小有名气)
引用回帖:
5楼: Originally posted by lance-tan at 2015-07-29 10:34:38
1.产物浓度不够，对后续DGGE影响较大
2.看下面都有引物二聚体了，可以适当增加模板浓度，提高一点退火温度试试看
建议把产物浓度调节好再上样，不然也是浪费时间。...

现在退火温度12℃、低了么

[ 发自手机版 http://muchong.com/3g ]
赞一下 回复此楼
9楼2015-07-30 19:20:13
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

635270fmaifx

铜虫 (初入文坛)
引用回帖:
9楼: Originally posted by 小情绪你不懂 at 2015-07-30 19:20:13
现在退火温度12℃、低了么
...

您好 你的上述问题解决了吗 我的实验也出现如此类问题 pcr产物有明显的亮带 但是DGGE条带很少或者没有  憧憬你的答复 谢谢
赞一下 回复此楼
10楼2016-04-21 11:09:21
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 小情绪你不懂 的主题更新
101/1返回列表
普通表情 龙 兔 虎 猫
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 数二 英语一，求调剂，本科学校福建农林大学 +3 五峰尖 2026-03-29 3/150 2026-04-04 23:10 by zhyzzh
[考研] 288求调剂，一志愿华南理工大学071005 +4 ioodiiij 2026-04-04 4/200 2026-04-04 22:49 by barlinike
[考研] 材料调剂 +18 一样YWY 2026-04-02 19/950 2026-04-04 22:14 by hemengdong
[考研] 292分，材料与化工，申请调剂 +22 程晴之 2026-04-01 26/1300 2026-04-04 22:03 by hemengdong
[考研] 272求调剂 +4 松柏常青5 2026-04-03 4/200 2026-04-04 17:03 by babysonlkd
[考研] 一志愿0817化学工程与技术，求调剂 +24 我不是只因 2026-04-02 28/1400 2026-04-04 15:15 by dongzh2009
[考研] 310求调剂 +18 争取九点睡 2026-03-30 18/900 2026-04-03 18:35 by ls刘帅
[考研] 085801 总分275 本科新能源 求调剂 +19 bradoner 2026-04-01 23/1150 2026-04-03 10:07 by linyelide
[考研] 325分化学调剂 +5 15771691647 2026-04-02 5/250 2026-04-03 09:58 by ChemPharm
[考研] 一志愿厦门大学材料工程专硕354找调剂！！！ +8 贝呗钡钡 2026-03-30 8/400 2026-04-03 09:41 by hypershenger
[考研] 327求调剂 +9 汲亦昊 2026-03-29 9/450 2026-04-02 11:44 by 运气yunqi
[考研] 279求调剂 +6 学而思兮知 2026-04-01 6/300 2026-04-02 09:16 by vgtyfty
[考博] 26年申博 +3 staryer 2026-03-30 4/200 2026-04-01 23:21 by ai4pharm
[考研] 材料专业调剂 +5 啦啦啦哭 2026-03-31 6/300 2026-04-01 16:48 by JourneyLucky
[考研] 311求调剂 +10 李芷新1 2026-03-31 10/500 2026-04-01 14:38 by chenqifeng666
[考研] 0855机械初试280求调剂 +3 kazenotori 2026-03-31 3/150 2026-04-01 10:08 by JourneyLucky
[考研] 调剂申请 +8 张张张张zy 2026-03-31 9/450 2026-04-01 08:29 by zjbkx
[考研] 江苏苏北高校诚邀调剂同学 +3 zzll406 2026-03-31 3/150 2026-03-31 16:54 by 及时行乐fan
[考研] 262求调剂 +7 ZZ..000 2026-03-30 8/400 2026-03-31 10:05 by cal0306
[考研] 085601一志愿西北工业大学初试346 +4 085601初试346 2026-03-30 4/200 2026-03-31 07:47 by jp9609
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭