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原核表达方面的问题，求各路大神不吝赐教 已有7人参与
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最近在做原核表达，现在已经将目的基因与 pet28a连接好并转入了top10，测序正确后提取了质粒，下一步准备将质粒转入bl21。 问题就来了，每次做转化都不成功，板子上长满了克隆，可是挑12个没有一个是阳性的。::>_<:: 针对这个问题，我也分析了原因，1是感受态（我后来又用了同学的感受态，这批感受态他之前用过，没问题），2是板子的抗生素（我用这批板子做过其他实验，也没问题）3是质粒（我又把提出来的这个质粒送去了测序，也没问题）4实验操作（转化我做过很多次，而且这个转化实验我也重复了几次，每次都没阳性克隆） 问题就是这么个问题，请各路大神帮我分析分析，我第一次做原核表达。（额～本来想发金币表示感谢的，可是我穷，就三十个-_-||，所以。。。）请各路大神不吝赐教，先谢谢啦 [ 发自手机版 http://muchong.com/3g ] |
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游侠892
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【答案】应助回帖
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感谢参与，应助指数 +1
nianmo0599: 金币+5 2015-07-26 20:28:20
感谢参与，应助指数 +1
nianmo0599: 金币+5 2015-07-26 20:28:20
| BL21生长速度比DH5a或top10快一些，建议你转化之后培养时间稍微短一点试试。 |
11楼2015-07-26 10:08:04
wuwuqaz
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