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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 蛋白电泳/WB » 电泳Marker分子量的归属问题
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追风的人偶

木虫 (小有名气)

呢喃的歌声

[求助] 电泳Marker分子量的归属问题 已有1人参与

蛋白样品为Aβ1-42，单体分子量为4.5 KD。
凝胶用的是Tricine-SDS-PAGE，三层胶，厚度1.5 mm，自己配的。
（图1）电泳条件是70V，跑了大约15h，怕时间久了温度太高，所以用了冰浴。
显色方案是银染，用的碧云天的快速银染试剂盒，显色时间大概在10 min左右。

Marker用的分别是Thermo的26616和26632（图2）：其中26616是预染的，我用它来观察蛋白泳动的情况，标注的分子量应该没问题，染色前70 KD的条带是红色的，10 KD的条带是绿色的；26632是非预染的。

问题是26632指示的分子量该怎么对照：
1、如果按（图1）中（1）标注的，10、15、25 KD的条带跟26616的能对上，但是3.4和5 KD的条带不见了，是什么原因造成的？
（（图3）是猜想它俩跑出去了，换了1 mm厚度的胶来跑，70 V，4 .5h，好像下面也干干净净的，啥都没有）。

2、如果按（图1）中（2）标注的，从下往上依次标注，要怎么解释两种marker指示的分子量差别那么大？

之前没怎么接触过电泳，最近才开始做，重复了好多次，都是差不多的结果，很困惑。请大家给咱指导一下，先谢谢了！

电泳Marker分子量的归属问题
P50710-222121_副本_副本.jpg


电泳Marker分子量的归属问题-1
P50722-145623_副本.jpg


电泳Marker分子量的归属问题-2
P50715-195720_副本.jpg
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错过了的就是永远。
1楼 2015-07-22 17:26:02
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追风的人偶

木虫 (小有名气)

呢喃的歌声
引用回帖:
4楼: Originally posted by LG123456789 at 2015-09-14 15:28:00
70V跑15h，，，
我们一般是100V-140V跑1-2h。
你银染显色的时间有点太长了吧，背景好深。
PS:本人新手，不对以上言论负责。
再PS:同制备Aβ寡聚体中，4度孵育后离心，上清里啥都没了。。

我后来发现是我的负极buffer配错了，才跑不动。换了正确的跑，70V跑到夹层胶，再换120V跑到底，一共用了3个多小时。

第二块胶背景深是因为试剂盒里的银溶液用光了，就用了别人配的。平常我用乙醇：醋酸：水=50：10：40固定过夜后，用试剂盒染出来的背景是很浅的。

我现在在摸孵育的时间，文献上的孵育时间只能做参考。打算加了F12后4度孵育，在不同时间点取样，不离心，直接变性，看看它们的分子量分布，再决定下一步怎么处理它。

你说的啥都没有，我没遇到过，我之前即使是buffer配错了，也是有条带的。等我结果出来了以后，在接着讨论吧。寡聚体不好做，共勉！

发自小木虫Android客户端
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错过了的就是永远。
5楼2015-09-15 14:42:24
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追风的人偶

木虫 (小有名气)

呢喃的歌声
自己顶一下

[ 发自小木虫客户端 ]
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错过了的就是永远。
2楼2015-07-23 08:40:05
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追风的人偶

木虫 (小有名气)

呢喃的歌声
老师让我按（2）所标示的来看，我再摸索摸索孵育条件。
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错过了的就是永远。
3楼2015-08-03 10:23:49
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LG123456789

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

70V跑15h，，，
我们一般是100V-140V跑1-2h。
你银染显色的时间有点太长了吧，背景好深。
PS:本人新手，不对以上言论负责。
再PS:同制备Aβ寡聚体中，4度孵育后离心，上清里啥都没了。。
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4楼2015-09-14 15:28:00
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